关于EB体外分化的问题

your1024

想请问一下，miPS/mES悬浮培养形成simple EB之后，想在六孔板里进行体外定向诱导分化，怎样把EB接种到孔里呢？是直接用EB贴壁，还是把EB打散了之后再贴壁呢？接种的EB数或者细胞量是怎样的呢？诱导分化的话，是贴壁之后再加定向诱导液，还是悬浮的时候就可以加诱导液了？那天数怎么算呢？还想请问一下，EB贴壁之后还能传代不？谢谢！

ielisa

你问的问题很好，我也很想知道！望高人帮忙解答！- u9 x5 l! q8 a: c6 f
EB贴壁之后就不在传代了，因为你要做诱导分化实验的嘛，好不容易到这一步了，你再传代，那岂不是前功尽弃了？

your1024

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呵，共同进步哈！可惜这版里高手不屑于回答太低级的问题，连版主都没有光顾。。。

细胞海洋

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应该是都很忙吧 再耐心等待一下吧

your1024

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呵，每天都刷新好几次的。。。

bio-bin

我觉得做的方法有很多，要根据你要分化的方向决定吧！EB是完整贴壁，还是消化成单细胞再贴，都有一定可行性，置至于如何做更要根据你分化的细胞类型来决定，一般是营造一个适合你要分化的细胞生长的营养环境。比如说铺个Gelatin或胶原蛋白或Matrigel等，具体实验具体安排嘛！至于接种的EB数和加诱导液的问题，最好还是借鉴前人的经验，多看点文献了！举个例：要分化成血细胞，一般的思路是诱导细胞向中胚层分化，这里就可以有多种方案了，在EB分化是可以加些利于向中胚层分化的细胞因子或刚开始阶段加一些不利于向外胚层和内胚层分化的抑制物抑制某些信号通路等等，接下来的分化就是前面提到的尽量营造适合血细胞生长的营养环境了！个人意见仅供参考！

your1024

回复 bio-bin 的帖子5 L- X# V8 R0 S+ k0 o9 A

! k8 E6 s6 a* l; U9 ~/ J" c# \/ J意见宝贵，多谢多谢！

waterbubble

悬滴培养的不是在皿盖上吗，2天后转到低吸附培养皿中，就可以了不会贴壁的。

智露

我也做，你是诱导分化什么?我是诱导分化为心肌细胞