现在开始准备养小鼠成纤维细胞，请前辈们赐教。

暗红色的风

我准备要开始诱导IPS细胞，现在第一步养小鼠成纤维细胞。我定一周大小BALB/C mice，组织块培养法：从师兄那里得到的Protocal  请大家分析补充。谢谢。在冷的PBS中将尾部皮肤剪成1mm3的小块，真皮朝下贴在干的100mm培养皿，放入培养箱15min等组织块上的PBS干后（防止漂浮），每个组织块滴100ul 左右的FBS培养过夜。第二天加入10%FBS的培养基，大约4-6天成纤维细胞长出组织块。消化传代，用3-5代的细胞感染。同时请问大家成纤维细胞的培养基：普通的DMEM，10%FBS. 双抗。请教成熟的培养方法。谢谢。

刘森泉

回复 暗红色的风 的帖子5 [% ~" J% ~, ?( Z

6 L$ e; {' i, ?( c/ e4 h) A  ]关键在于防止污染，细菌真心难对付，我已经做了好几次了，都以污染告终。

暗红色的风

回复 刘森泉 的帖子" Q( j' \$ S/ f7 Y9 D$ J
& s! X( @; C# E3 s# A1 y! E- M& U
请问有成功的经验吗？
" F: }% V7 E! p, J: @; a  s您的Protocal 是怎么样的，可以借鉴一下吗。谢谢

刘森泉

回复 暗红色的风 的帖子
' z* B- R8 |) a4 g8 P% A1 G
7 v) X+ I, }2 Q8 U$ o. Ihttp://www.stemcell8.cn/thread-57892-1-1.html

yuhaoze

我还是喜欢用胎鼠做，污染率小一些

牙牙丫丫123

你可以试试这个~我们做还好~污染也是有的~不过只要洗的够干净就没问题~( }! m7 _, k( I' ~; H0 |
一、成纤维细胞原代培养0 f) [- N/ p5 f$ `  S! t
1．取材
% D( @6 z1 i7 o0 @8 J取取剃毛后的组织（1cm2），置于盛放PBS（加双倍双抗）15ml或者50ml的离心管中，放置于冰上准备带回实验室取材用。" u2 B! R0 J4 c
2．材料处理        . \( q/ i' S3 a& I+ d( A9 p
（1）组织带回实验室后用加有双倍双抗的PBS冲洗后的置于3.5cm培养皿中，用手术刀去除皮毛和骨。5 b  A8 K/ [, C2 F0 [+ R
（2）在盛有DPBS的平皿中，用镊子将耳缘组织上残余的毛拔掉，反复清洗，直至DPBS中无任何杂质为止。  ]" o( [4 R- r# k- h, o" \' X0 v0 }
（3）将组织放入一小皿中，尽量将其剪碎，呈糊状，加入少量培养液。
* q8 T9 J( J1 ~- S9 d/ q3 R% o3．细胞培养
: H4 D0 d/ k$ Z: {（1）收集组织块转移至15ml离心管中，离心1000rpm，3min。; @1 h) g* \: }3 g4 P
（2）弃去上清，以培养基重悬组织块，转移至T25培养瓶中，尽量将组织块均匀分布，同时小心吸去组织块周围的培养基。
! f) g# y$ x/ O8 k! s8 i1 r（3）倒置培养瓶37℃过夜培养，次日翻转，加入1.5ml培养基。
6 Y$ b+ X2 Q& a! ?（4）隔日换液，约4日可见组织块周围有细胞爬出。

暗红色的风

回复 牙牙丫丫123 的帖子4 f8 w2 A' X2 \( u; C% j4 l

0 G1 D  T+ C; N0 ^非常感谢，准备明天试试，谢谢！

暗红色的风

回复 牙牙丫丫123 的帖子
8 H- |' o! `* @" o; |8 B4 y! V4 c# \: d4 G' l4 n5 Q
请问PBS加多大双抗浓度？谢谢！

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子
. m  J1 m) i' L2 k, b2 O2 d" k+ L  T1 n' e
谢谢，因为刚刚开始养细胞，胎鼠太贵了，所以先用成年的鼠培养成纤维细胞，等有了经验后面再养胎鼠细胞做Feeder。请问您做IPS细胞先是取的胎鼠成纤维细胞，后面养feeder也是胎鼠的吗？

暗红色的风

回复 yuhaoze 的帖子0 x4 m4 H, y; a2 H

8 \$ R3 W$ o) x* [: _谢谢，因为刚刚开始养细胞，胎鼠太贵了，所以先用成年的鼠培养成纤维细胞，等有了经验后面再养胎鼠细胞做Feeder。请问您做IPS细胞先是取的胎鼠成纤维细胞，后面养feeder也是胎鼠的吗？