干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

注册

找回密码

 

 

搜索
干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 › 干细胞之家论坛 › 干细胞实验室技术交流 › 动物克隆与疾病模型专区 › 求助一个问题（简单的酶切问题）
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 19951|回复: 7
 go

求助一个问题（简单的酶切问题） [复制链接]

fwyou

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
366 
威望
366  
包包
951  

优秀会员

楼主
发表于 2012-7-11 23:12 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
坛友们好，
9 I4 W7 `( I- q$ p请教大家一个问题，我做pcr产物酶切，但是总是且不完全，PCR产物长500bp ，HindIII酶切后应该是200bp+300bp，但是总有500bp的遗留，我找了酶的用量和pcr产物量，但是还是不行。而却我还确定，在500bp的HindIII位点没有SNP。请问大家是什么情况引起这个问题？谢谢啦
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

收藏0 分享0 顶0 踩0
回复 引用

举报 返回顶部

pailishi

Rank: 3Rank: 3

积分
455 
威望
455  
包包
463  

金话筒 优秀会员

沙发
发表于 2012-7-12 08:24 |只看该作者
如果是部分切了，部分没有切开，那是酶的效率的问题吧？NEB的酶37度切1-3h好像很好啊，再说你也可以纯化了直接往后做连接、转化什么的 啊
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

囡囡

Rank: 1

积分
45 
威望
45  
包包
448  
藤椅
发表于 2012-7-12 08:51 |只看该作者
你可以延长一下酶切时间，不知道你是哪个公司的酶 我们用Fermentas的快酶切四个小时 一般切的都很干净
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

jiefengbing

Rank: 2

积分
113 
威望
113  
包包
252  
板凳
发表于 2012-7-12 09:04 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
延长酶切时间，找到合适的酶切温度
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

妖妖空

Rank: 3Rank: 3

积分
481 
威望
481  
包包
479  

优秀会员 金话筒 帅哥研究员

报纸
发表于 2012-7-12 09:30 |只看该作者
酶切不彻底应该是酶的问题吧，不过一般按照说明书来的话很少有问题，HindIII酶切3个小时应该足够了吧，你试着延长一下酶切的时间和改变一下温度再试试看吧。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

youzi821

Rank: 2

积分
88 
威望
88  
包包
235  
地板
发表于 2012-7-12 10:47 |只看该作者
适当加大酶量，延长酶切时间（如果时间长了没有星活性的话）
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

wang3033

Rank: 3Rank: 3

积分
396 
威望
396  
包包
1235  

优秀会员 金话筒

7楼
发表于 2012-7-12 11:20 |只看该作者
过夜酶切应该没有问题
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

fwyou

Rank: 7Rank: 7Rank: 7

积分
366 
威望
366  
包包
951  

优秀会员

8楼
发表于 2012-7-13 01:08 |只看该作者
坛友们，可能还还没论述详细，NEB，TAKARA 的都试过，时间2h 4h 过夜都是试过，回收量100-300ng 酶量0.5ul-2ul  20ul体系 温度37
( P5 q/ e$ v- v9 ]% I) x. V* B
5 b4 V& K9 i" k' D" b5 P; \但是就是不行
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

回复 引用

举报 返回顶部

‹ 上一主题|下一主题 ›
返回列表 发新帖 回复
高级模式 | 发表帖子
B Color Image Link Quote Code Smilies
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2024-5-9 09:07

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.