求助外周血单核细胞诱导ips

ada800515

请问群里有用外周血诱导ips成功的吗？做了很长时间一直没有结果，想找有经验的人指点一下啊。

yuanyan2010

可以讨论下，我们这边也一直没结果呢。9 O% M9 S" I! G% b

hkenb

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6 R7 ]' L9 I5 S9 ]& `; u' n5 ~3 x; Y$ H7 x
将里面的CD34阳性细胞分出来！利用外周血造血干细胞做iPS，效果会好很多！

yaolinzhang

你做过吗？是直接诱导还是先扩增后诱导；我也做了好长时间了，还没结果呢！

yaolinzhang

你做过吗？是直接诱导还是先扩增后诱导；我也做了好长时间了，还没结果呢！

hkenb

回复 yaolinzhang 的帖子$ z: b; K$ h' [- E% H2 u, P( n: S  C

% R) s0 v+ ?' E" M; ~不用扩增，不过细胞量要比较大，采用电转非整合载体的方法，之后种feeder上诱导。

荣荣荣

回复 hkenb 的帖子0 a' l$ z: z0 I3 o8 @: M
7 v3 d4 N! Y- C- @  a
请教一下一般用多少血来分离多少单核细胞出来够做iPS的？如果选出CD34+，细胞量要很大吧？分离出来可以冻存么？

hkenb

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8 V0 M& _1 n' |0 f
# T' Q( N4 u5 _, o细胞量要求不大，视电转效率而定，10左右，具体可能要摸一个梯度。但是电转后种到feeder上，要比MG上好。不要冻存。

荣荣荣

回复 hkenb 的帖子4 e$ K* \2 h0 b* w1 w" U

  S7 c$ Y% S" B4 R1 V非常感谢。feeder能坚持那么久么？你一般是用多少的dish做的啊？10 cm能挑出多少个？

hkenb

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2 C% s( P+ p/ @; e! l8 E可以补加condition的培养基，6孔板就可以了，我也是介绍组里他人经验。