求助外周血单核细胞诱导ips

ada800515

请问群里有用外周血诱导ips成功的吗？做了很长时间一直没有结果，想找有经验的人指点一下啊。

yuanyan2010

可以讨论下，我们这边也一直没结果呢。
6 |, O0 ?* g/ o0 q3 `

hkenb

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! b$ V( I+ ~% L- I  j( k9 W& m& O7 H7 x7 Z! J* T7 e2 b% h
将里面的CD34阳性细胞分出来！利用外周血造血干细胞做iPS，效果会好很多！

yaolinzhang

你做过吗？是直接诱导还是先扩增后诱导；我也做了好长时间了，还没结果呢！

yaolinzhang

你做过吗？是直接诱导还是先扩增后诱导；我也做了好长时间了，还没结果呢！

hkenb

回复 yaolinzhang 的帖子8 d7 M+ z8 c% ~* A9 j* [

7 U1 N  ^$ l) p, W不用扩增，不过细胞量要比较大，采用电转非整合载体的方法，之后种feeder上诱导。

荣荣荣

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8 [( o& V9 x' B* }" I( B' B
3 H" V! c$ M. U5 G) O5 ]请教一下一般用多少血来分离多少单核细胞出来够做iPS的？如果选出CD34+，细胞量要很大吧？分离出来可以冻存么？

hkenb

回复 荣荣荣 的帖子6 b  u! }; z. k* L5 Y; a6 ?8 r" [$ B

# \# o, j- c3 f) c" ~% O细胞量要求不大，视电转效率而定，10左右，具体可能要摸一个梯度。但是电转后种到feeder上，要比MG上好。不要冻存。

荣荣荣

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* g/ ]2 `" W) T5 ^) j6 W) p! F  o; v1 ~( v% s8 I8 S5 s
非常感谢。feeder能坚持那么久么？你一般是用多少的dish做的啊？10 cm能挑出多少个？

hkenb

回复 荣荣荣 的帖子4 |' r4 E, e: D) p; u4 T6 K
) q+ E: S: V$ l% }' p+ c8 D
可以补加condition的培养基，6孔板就可以了，我也是介绍组里他人经验。