分子克隆：现在问题估计出在了连接上，因为空载体单切自连做转化不成功

yaolinzhang

回复 weiyepan 的帖子) B; a+ L( C2 E

. d2 p, J) S" T; }9 @5 }& F6 _非常感谢您的宝贵建议，我明天试试，谢谢！

yaolinzhang

回复 刘森泉 的帖子- y9 R, _3 g; E7 F: ?

( c! I5 A7 m& y% j, k% |5 `, M我们的片段是加在T载体上扩增的，然后做的酶切

weiyepan

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PCR产物是5'羟基末端，酶切过的地方是5'磷酸末端。. }* A9 @9 ], g- ?( [
如果磷酸酶处理过的片段，那5'也是羟基末端。7 y) m* Q8 L. F. k# W. G
连接只能在5'磷酸和3'羟基之间进行。