细胞养了2年了，没碰到过这样的情况，大家帮帮忙吧！

yuhaoze

: y1 l1 N6 w4 w" c" e7 z
3 J  O  U4 q4 H& l, {- T$ V2 t/ k最近养癌细胞，出现问题：以前的做法是，加上胰酶洗一遍，再加胰酶消化，一直到漂，然后终止消化，细胞状态很好。现在同样的做法，不管消化多长时间，细胞都贴在那里不往下掉，一吹打细胞就碎，没一个活的。
, c7 E/ r. M8 b3 F: \1 c: O不知道问题出在什么地方，怎么解决
, _  P8 O2 H0 a) K/ q大家有没有遇到同样的问题

coffee.cat105

你用的什么公司的胰酶、

yuhaoze

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9 c2 i: S& @5 r  U# i0 r( u- `6 Y- f2 {. L4 w) g; s
sigma,一直都是这个，你觉得是胰酶的问题？
" Y" M$ }* f% E: x3 ~

yuhaoze

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: v/ p2 n+ H5 g
3 `0 q( R( m! _加上之后倒还真是能看出来有点类似凋亡的特征，但实验室其他人说胰酶很好用啊

coffee.cat105

我们用Hhclone的胰酶也出了问题了，形态什么的都可以，就是流式检测抗体标记不上，正头大呢，所以问问你9 c7 S3 S  ^' V

WAX

你的胰酶是不是粉末自己配制的，如果是，有可能是过保质期，胰酶失效了，消化能力差，损伤了细胞却消化不下来，我们以前遇到过类似的情况

yuhaoze

回复 WAX 的帖子$ ^, \) O9 ~: |- X
. [+ W3 b! K) w# f& @% ^
. b/ w0 F5 D2 Z. h
如果是这样的话那真需要警惕了

WAX

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! z2 a" X7 c! W3 \8 T  i
/ b( H: t1 g+ O- @( P9 p6 {/ ~粉末也是会过期的，用个两年就差不多了，买一瓶新的吧

yuhaoze

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/ N# k6 o8 c+ u" R* Q, O
, ^% N, U8 n& n5 j1 R% _好的'谢谢

wangzhiqi86

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& b) `+ c. @1 i" E6 G* J2 Y4 j. M6 V' |+ \: ^% |
极有可能是胰酶时间长了之后失活所致，我之前也是在37℃预热时间长了之后细胞怎么也消化不下来，建议你再重新用胰酶粉末再过滤配一瓶试试，里面EDTA也要加的。
  w6 z, D' c& F1 ^我的经验是，每次预热的时候，胰酶最后预热，不要超过5min，甚至可以放在室温一段时间就行。很多胰酶并不是在4℃放的时间长了失效的，而是经常性预热失活的。' T" L3 e! N% Y0 D
胰酶用的是Invitrogen的，一瓶粉末可以用很长时间。配成2×的过滤后分装冻存在-20℃，用的时候再解冻，一个月内没问题。