脐血干细胞培养相干问题？

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这是我种的脐血。请问有没有所谓的间充干？还有我接着养下去他为什么渐渐的死了？我用的是DMEM+10%FBS，谢谢大家。

gghywtfz

这                    这是第几天的细胞？ 接种密度是多少？ 图片里有成纤维状的细胞，但是看不出是否是MSC。  需要逐渐养下去才行。

bsx1111

脐血的不好养啊，我养了好几份都没出来间充质

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这是第11天的细胞，接着养下去就都死了，我也不知道怎么回事。我没有算密度。但是我是20ml脐带血缓慢加到20ml淋巴细胞分离液上，2000r离心十分钟，大概7天换液 ，一般都能长成这样子，但接着就慢慢死了。我真不知该怎么养下去了？还有里面很多圆细胞，应该是破骨吧，老影响她们长。也不知怎么去掉。

huajie881026

7 U! Q; @5 d* r6 @1 E1 X
' r# A" w3 L7 E1 Z* e. ?脐血的MSC不好养，园的细胞应该是破骨样细胞，你图片中的成纤维样细胞也不一定是MSC，可能就是非增殖的成纤维样细胞，如果是MSC应该会形成细胞集落。你可以试着再等等或者重新开始！9 O, @8 d% w, c3 q9 ~( ?! a
你用20ml脐血量太少了，我用50ml养了好几次都没成功，用100ml以上才有较大机会成功，还有你从获取脐血到分离获得MSC的时间越短越好，最好一拿到脐血就开始操作。脐血量和时间是两个非常重要的因素。如果量足、分离时间又短，操作又没有不当之处，成功率应该可以达到80-90%，如果还是没有获得MSC，那就说明你这份脐血里面可能本来就没有MSC（脐血里MSC不是每份都有的）。: |0 v; u4 X. U
PS：7天换液时间稍长了，如果真有MSC的话，3天时间肯定已经贴壁了，你换液甚至很用力的震荡都不会脱落，所以我建议3-5天就可以换液。" q- U8 k+ a1 X

pailishi

我养的脐血内皮祖细胞，也是先分单个核细胞，再用EGM-2养的，结果经常出现间充质克隆的污染，貌似也有个体差异

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好的  谢谢

细胞海洋

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) S4 G& s3 g; n. D3 s9 D' w
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4 w* {8 E" _1 P4 a
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透明之蓝

相文 发表于 2012-8-1 22:18
5 j4 _$ v2 k* ]2 \, G这是我种的脐血。请问有没有所谓的间充干？还有我接着养下去他为什么渐渐的死了？我用的是DMEM+10%FBS，谢谢 ...

$ m  a3 Z3 H- D3 O: v5 E( j不好意思，脐血里面MSC含量很低，不好养！倒是可以养造血干~

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# y+ `& }2 m- a6 Z% H好的 ，谢谢，我再试试