请教一下大家都是怎么鉴定mES的

vegetax4132

最近刚拿到了几株新分出来的mES，老板让先鉴定一下。
1 F- W1 a$ B/ [4 ]目前我想从3个方面入手：
" ]' Y$ Z+ T$ {1.QPCR看下干性基因和分化基因。
( x! O2 W6 e% R4 `3 ^) ]/ P2.给克隆染下干性基因的免疫荧光。8 w5 e7 @6 Y6 I, d$ R
3.悬EB做下切片染色。  V+ g0 z7 u4 e& N0 S$ F
6 S9 b5 R7 o5 e* Z; Z! C6 X
在这请教下各位战友都是怎么做的？ 还有在鉴定的过程中有什么需要注意的吗？

wwwsdzsgov

严格的话，RNA水平，蛋白水平，体外分化，体内分化，嵌合动物都做就行了。

wbj1983

回复 vegetax4132 的帖子3 J# p! G$ ~5 ]+ k! V
8 _/ F4 G; I5 F/ c" H  r
1、QPCR可以检测一下OCT4、Nanog、sox2等干性基因表达情况，相对比较简单。3 `& w- t, v8 I
2、关于免疫荧光，可以染色OCT4、sox2、nanog、SSEA1等，也可以用western blot检测。
1 ?5 Z/ Z" e2 f! w' c3、EB切片染色可以染色D-SMA: alpha smooth muscle actin; vWF: von Willebrand Factor; GFAP: glial fibrillary acidic protein; AFP: alpha-fetoprotein。
4 p8 T' i/ v" Z6 p( _+ m( u% @4、还可以在体内分化做畸胎瘤实验，然后切片染色HE。& ^+ B7 B2 S8 J. X/ p
5、还可做2N嵌合体和四倍体补偿实验。

smallbite

能否解释一下2N嵌合体和四倍体补偿实验，谢了！

细胞海洋

回复 smallbite 的帖子) L+ b; o3 X" }$ l9 I9 U
  z* M! L2 H1 X" z+ W5 P# Y3 s8 U
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样1 o* V! Q4 g$ y
1 f+ |1 b/ b* M1 K3 J% s4 G3 E
否则他会看不到

chenks

回复 vegetax4132 的帖子, r1 Q# O* w, I1 Z
- z# v% `9 Q- ?- D
鉴定包括多能性基因的RNA和蛋白水平的检测(QPCR和IF) ;核型鉴定; 多能性基因启动子的甲基化修饰;传代分析(是否能稳定自我更新); 嵌合鼠(将细胞注射到小鼠囊胚内细胞团中,再移植回母体,观察后代小鼠,最后回交,观察能否生殖传递); 四倍体互补(这个比较复杂,你可以上网搜索一下)