如何去除质粒中的内毒素

hhs359853381

请问用什么方法可以去除质粒抽提中的内毒素

星移龙一

现在一般的生物技术公司都有去内毒素的质粒抽提试剂盒。

gl248576

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* G! Y/ e9 I7 X0 A2 s7 C/ X. H: d0 ]1 Y1 F, q4 m5 w
我们实验组用的是这个试剂盒：无内毒素质粒小量提取试剂盒/Endo-free Plasmid Mini Kit 50T，效果还挺好，而且还便宜* x, O3 F! y8 F( R

hhs359853381

回复 gl248576 的帖子9 i1 h6 A" @7 D5 h2 W
' m) M& k& B! C' M6 B& T
谢谢& s3 I5 j1 b2 R7 R  G

蓝O海

内毒素只能是相对低于某个限值，不饿可能完全的没有。内毒素不是可以稀释掉么，你可以试着多倍稀释后在收集质粒啊，不知道我说的对你有没有帮助。7 G8 E+ e, t# k+ i# y+ c8 v" r

shy8610

0 G7 |- I! Q& a/ r* N* \4 w9 E
7 @5 r' |& _+ R& q回复 hhs359853381 的帖子
( y; \4 b5 `: ?% m4 @
7 y1 S, _; m# }! Q: _) d+ R我们的通常做法是，如果是转染或动物免疫用的质粒，我们直接选用qiagene带去内毒素的kit（GIGA）,如果楼主已经得到质粒，我见过很多朋友（他们是私营生物公司），他们的做法是购买去内毒素的柱，过一次柱就ok

weiyepan

上鲎试剂网站看看，应该有去内毒素的beads卖。
# C5 a! \; @" w$ mOmega也有去内毒素的minispin kit卖。

huangcong1988

转细胞的话，质粒是要去内毒素的，那你最好就是用去内毒素的试剂盒提取质粒，这种试剂盒很多，omega，qiagen都有，如果你已经用不去内毒素的试剂盒提了质粒的话，建议你用质粒再转化一遍重提

做个好孩子

可参考BIOG实验步骤# A" E2 K$ ~# h9 E$ A/ U
(请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇)0 J& y4 V+ n5 l7 p1 F3 R
取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。
$ @& a/ j3 `! [. |0 X+ P. Y加入3mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。
) @6 ]0 t1 q* T: O0 z加入2mL溶液I和40uL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
" N- Z0 F. F# H% V, _4 J加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合）; x2 W- b1 g& N! [
加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）  T8 \2 J! g7 l. i
10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）6 ^9 S5 c5 z; L7 u8 n& C6 ~& x: C
加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10分钟。10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。4 p7 i. c3 C! |0 |* Z) X
（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）2 u- [: e- H3 M+ p6 {- [# p& r
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体，室温晾干沉淀。* @) U) W5 L7 C1 W+ D
加入0.3mL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解并转移至新的1.5mL离心管中。
5 r% S, u. W5 M+ S# ~; a加入10%体积溶液V，充分混匀，冰浴5min。; ^" F, d/ @' C1 F5 n
加入3%体积溶液VI，反复吹打混匀，旋涡震荡15min。/ e  z$ W5 k- p4 i& r
50℃水浴5min，室温12000rpm离心3min，溶液分相后，吸取上层水相至新的离心管中。
! i' ]$ o: e; s: q重复步骤10~12两次。2 y6 J7 A( B  f  \
加入700uL无水乙醇，充分混匀，室温放置5分钟。12000rpm离心10min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。! p, T! p4 O# u- s; ~" n
加入700uL70%乙醇，温和震荡30Sec，12000rpm离心5min，轻轻弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余液体，室温晾干沉淀。1 A, e8 C/ }  o
加入50μL溶液IV，温和震荡2分钟，使沉淀完全溶解。