如何去除质粒中的内毒素

hhs359853381

请问用什么方法可以去除质粒抽提中的内毒素

星移龙一

现在一般的生物技术公司都有去内毒素的质粒抽提试剂盒。

gl248576

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) i6 w; l9 k) D  ?* F6 m% [' Y我们实验组用的是这个试剂盒：无内毒素质粒小量提取试剂盒/Endo-free Plasmid Mini Kit 50T，效果还挺好，而且还便宜
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hhs359853381

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5 ^, B% {% i3 V( Q4 S谢谢! g4 o! T- y0 w2 l! M

蓝O海

内毒素只能是相对低于某个限值，不饿可能完全的没有。内毒素不是可以稀释掉么，你可以试着多倍稀释后在收集质粒啊，不知道我说的对你有没有帮助。2 h# ], R. Q, a9 x4 O

shy8610

1 J: t9 o  P% V) |2 @! o2 P
! V6 n4 G$ T% y1 X: P% T回复 hhs359853381 的帖子7 G: C) z- ~% X7 a: R
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我们的通常做法是，如果是转染或动物免疫用的质粒，我们直接选用qiagene带去内毒素的kit（GIGA）,如果楼主已经得到质粒，我见过很多朋友（他们是私营生物公司），他们的做法是购买去内毒素的柱，过一次柱就ok

weiyepan

上鲎试剂网站看看，应该有去内毒素的beads卖。0 {  U0 l( P# N% ?$ P
Omega也有去内毒素的minispin kit卖。

huangcong1988

转细胞的话，质粒是要去内毒素的，那你最好就是用去内毒素的试剂盒提取质粒，这种试剂盒很多，omega，qiagen都有，如果你已经用不去内毒素的试剂盒提了质粒的话，建议你用质粒再转化一遍重提

做个好孩子

可参考BIOG实验步骤
$ ]0 e& x4 s$ z) u0 m% l$ B(请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇)
- Y! Q4 _1 c0 O1 Z' m取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。
; [' Y2 r" |8 S$ K4 k. L4 L加入3mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。* v. d6 H% s' @
加入2mL溶液I和40uL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
2 _8 b# t: x' U加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合）
% C; y2 k' f* V& I  d* Z. `  c加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）' w' G5 A/ ^& y; v4 R
10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）8 X/ C: x& A! u5 g# C9 b
加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10分钟。10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。% T$ B! V+ @7 O8 w/ k
（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）% N' z# `" c3 P$ E1 V5 y, B" K
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体，室温晾干沉淀。
; [0 a% z- p9 L. d; v# B0 h加入0.3mL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解并转移至新的1.5mL离心管中。+ s( a+ H3 @) ]
加入10%体积溶液V，充分混匀，冰浴5min。1 Y. }/ N: y- ]: v" c% R3 c
加入3%体积溶液VI，反复吹打混匀，旋涡震荡15min。: V1 U) o6 g" \( i" X
50℃水浴5min，室温12000rpm离心3min，溶液分相后，吸取上层水相至新的离心管中。. ~+ \+ B( y9 y# d2 c
重复步骤10~12两次。
$ P1 V/ f) x- }6 v加入700uL无水乙醇，充分混匀，室温放置5分钟。12000rpm离心10min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。
& K6 I/ [/ y' @5 C加入700uL70%乙醇，温和震荡30Sec，12000rpm离心5min，轻轻弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余液体，室温晾干沉淀。
( \8 e7 x3 |( l) D加入50μL溶液IV，温和震荡2分钟，使沉淀完全溶解。