天狼星红-苦味酸染色

songyang1987

我想请教一下 天狼星红-苦味酸染色的具体流程，天狼星红有的文献用的是0.5% 有的用的是1%的 两个浓度使用时有区别吗？天狼星红溶液是用水配制 还是酒精呢？此过程染细胞核用苏木精可以吗？ 还望各位不吝赐教！！！

songyang1987

更正： 天狼星红浓度是0.5%和0.1%

crystal_xjw

上楼说的对，是0.5%和0.1%。
' `# r1 E. |+ z6 t0 l
6 y) ]2 y5 r4 W' F/ c% e已知胶原有四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）区分并定量这四种胶原纤维，对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点，使用天狼星红苦味酸染色法，在偏振光显微镜下，可以根据双折光性和着色的不同，分别显示出四型胶原纤维。
4 s4 l. K/ E  G[组织固定与切片]
" k* E; n$ v  N9 z4 }4%甲醛液固定组织，石蜡切片。& z& K& H5 q+ O) L4 }* T7 x
[试剂配制]/ J+ @$ c' ^; ]1 y, k, ]2 ]
（1）  天狼星红-饱和苦味酸液：0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液90ml。
/ X: T! b/ X5 j7 F1 w3 \（2）  天青石蓝液：天青石蓝B1.25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250ml。溶解煮沸，冷却后过滤，加入甘油30ml，然后再加入浓硫酸0.5ml（注意硫酸一定要后加入）。# _" {  N) z* f. M% w4 I$ h2 [- A9 f- z
[操作步骤]
% f2 i! ]) ]2 k; A4 ~（1）  石蜡切片厚4~6µm，脱蜡至水。2 u, G4 m* a5 V( O3 O/ r
（2）  入天青石蓝液5~10min。) @! |9 ?' @6 ^6 R  k4 V
（3）  蒸馏水冲洗3次。+ z. x* `) \: `" I8 K4 K! W  |# X
（4）  天狼星红饱和苦味酸液15~30min；（可用Harris苏木素液淡染细胞核）。
! f; H; C& x1 d- ~" v（5）  直接用无水乙醇分化与脱水。# o4 _: w3 P; k2 A4 D) g
（6）  二甲苯透明、光学树胶封固。
) P- T. d* ?& V9 F[染色结果]$ l, v; I  q  l4 v
普通光镜观察：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他成分呈黄色。
: g, ?5 l6 E1 p4 @+ }  s偏振光显微镜下观察：
+ C7 x% S: g; C/ t+ ~Ⅰ型胶原纤维：红色或黄色，排列紧密，具强双折光性。
+ s1 f" r1 A' a6 F4 `' oⅡ型胶原纤维：多种色彩，疏松网状、弱双折光性。; p4 n& M- ^4 p; x
Ⅲ型胶原纤维：绿色、细纤维、弱双折光性。
1 B4 i) Y. \' X: ^8 n! OⅣ型胶原纤维：淡黄色、弱双折光性（基膜成分）。
& i1 c- p8 ]2 S1 i$ q9 v[注意事项]/ }) c2 }5 L; E3 X+ A* l/ n
为保持色彩鲜艳，应在染色后及时观察并照相。$ d# A% d6 E( \: l1 u/ G1 M

% ^6 u% V# `5 m0 G* \) S这是我在教材上找到的，希望能帮到你。

songyang1987

谢谢楼上 天青石蓝液和Harris苏木素都是染细胞核的吧 那可以直接用苏木素不用天青石蓝液吗？1 R  w% p6 b! k( M" p) H
0.5%的天狼星红 是用ddH2O配吗