怎么样替换基因组里面的一个基因？

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我想看看基因中得一个极性蛋白FtsZ在细菌中存在的状态,所以我在后面连了一个GFP，但是这个基因在细菌中本身就有表达,所以我想把细菌中得FtsZ给换掉,换成FtsZ-GFP，但是我不知道怎么做?好像说要用重组的方法,有没有人知道具体怎么做呀?/ c4 ?: e: E4 y' `& I) ^

weiyepan

细菌的话可以用RecA同源重组的方法，加上抗性筛选。

romanyuo

设计含突变位点的一对完全反向互补的引物。

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回复 romanyuo 的帖子
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那个只能在质粒上面克隆好带有突变位点的基因哇,但是整合到基因组里面去,怎么做?

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回复 weiyepan 的帖子" ~! n" z% g/ N$ L
+ p  A" w4 E3 w/ V: H
能再具体一点么?我查到是需要用重组,但是具体怎么做你知道么?  我听说需要三个质粒什么的..........

weiyepan

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具体就是让RecA结合到你的DNA片段上转化重组，RecA可以体外先结合，也可以在菌体内表达。如果你的菌株本身就有RecA表达的话，就方便很多了；如果没有，就体外先反应，再做转化。另外RecA重组率不高，要筛选阳性的转化子，最好还是加上抗性筛选。大肠杆菌现在做这个很成熟了，有个专门的热敏启动子表达RecA的菌株好像叫什么RED的，国内的文章挺多的，你去查查看。我再提供一篇国外的文献，你看看就大概知道了。