程序降温盒

fenglinzhu

程序降温盒能够直接放进-80度冰箱降温吗？最近做了个对比试验，A：放4度冰箱降温30min后放入-80过夜后液氮罐永久保存。B：直接放入-80过夜后液氮罐永久保存。复苏后发现两组细胞差异很大，B组基本培养不出单克隆，是不是程序降温盒不能直接放入-80冰箱？可是说明书上说可以直接-80的啊，而且说可以保证细胞1度1度的降温，可事实。。。求高手分析原因。

zhujiang007

程序降温盒是可以直接放入-80度的。你确定盒中加入异丙醇了吗？否则，细胞肯定活率不高啊！

也行天下

我们实验室都是把程序降温盒直接放入-80度的，细胞没问题。不过程序降温盒在放细胞之前要在室温放置一段时间。

bunny19870512

表示程序冻存盒确实应加入标线异丙醇之后直接就可以放在-80，不过就算没有冻存盒，我们用泡沫盒也冻过细胞，也是直接-80，没那么大的差异，所以考虑下你是不是冻存液或是操作有问题，最好平行做，一株细胞两管分开做~

xbqian

关键是用加入冷冻保护剂，比如DMSO，BSA，右旋糖苷等

lazyworm

程序性降温盒预先放4度是会好一些，因为细胞冻存时，冻存液是预冷的，细胞是在这种状态下放入降温盒的，不是从常温开始的。但是在常温下装入细胞后直接放-80也应该不会差很多。所以你再想想是不是异丙醇的问题，量是否达到刻度，用的次数是不是过多没更换。还有就是有人喜欢把程序性降温盒放-80很久，等用了才想起拿出来，如果这时放细胞，那可就达不到慢冻的效果了，所以要预先准备好。

fenglinzhu

回复 lazyworm 的帖子
* U( f) o' V1 M4 ?5 @' I4 A5 {" B8 A8 K) G3 N+ Y( w4 V; f
异丙醇肯定放了，不过当时放异丙醇的时候不是我放的，所以异丙醇远远超过了那个刻度线，后来也没及时取出多余的异丙醇，这有影响吗?

Dongqin11

程序降温盒就是直接放-80的，一般放个两三个小时就可以将冻存管转移出来了。不过用前需要提前拿出来将温度升到室温，然后不加异丙醇到刻度线，过点儿应该没什么太大的问题吧，它主要不就起缓慢降温的作用嘛。另外我们实验室用的冻存液是DMSO：FBS=9:1，效果一直都挺好的啊！

shy8610

嗯，楼主说的情况B很奇怪，我们组一直是直接-80，而后转的液氮，第一可能不知有没有加DMSO，这类的，我们的冻存液的配方是10%DMSO 90%血清，比较浪费，效果好，第二，异丙醇是需要定期更换的，不是说越多越好，当然我们也有几个月后忘记更换了，细胞也没出现明显异常，还有一点，忘了核对，我们冻存细胞前，程序降温后要平衡到室温至少2小时，然后放入细胞冻存管，不知道这些经验没有对你有所帮助

蒲公英

这个实验应该是单因子条件分析吧，你们有没有保证除了降温盒的降温条件有差异外，其他的实验条件都一样呢?平行实验的每管细胞密度是不是真的一致呢？要能够排除实验操作者的操作误差才行哦，还有你是直接复苏呢，还是在进行了其他的有可能影响实验结果准确性的其他实验了？比如非目标细胞的裂解等。此外，你们接种培养之前进行细胞计数了吗？每个平行的接种密度一致吗？冻存复苏后的洗涤，离心操作等会造成细胞的损失的，建议接种培养前进行下计数，以相同的密度接种，这样出来的结果才具有说服力~