MEF刚分的MEF，养了没几天就漂起来了，怎么回事？

水平梦

回复 细胞海洋 的帖子
1 r: N( J& s$ Y1 c, y  ?2 x2 _* W9 I* U
谢谢昂  

懵懂干细胞

回复 huangcong1988 的帖子
, M$ }' H* d& e% m
2 p  S% t( r2 Z$ x* I1 k# n长满时间没固定的啊，你剪碎分离的细胞比较多，肯定就长满比较快，你分离的细胞少，长满时间就比较长啊。这些都不是固定的，看你的细胞量哦！

懵懂干细胞

回复 huangcong1988 的帖子# L% L* ?9 B: h
! z8 I# U! b+ Q2 N- L" B. ]7 h1 P
冻存细胞技术你们实验室应该很成熟吧，我们冻存都很简单的啊，程序冻存盒-80一夜，第二天直接放液氮罐了！可能因为你冻存量一次过大，我一般是p1、P2、P3代分别冻存，每次最多3瓶，量太多了，会导致细胞在DMSO常温条件下太久，容易死，要速度！！

huangcong1988

回复 懵懂干细胞 的帖子
& m% ^; l  p' h) t. |1 @* w+ m$ F- h+ B( J/ Z+ e0 v" @/ T
恩，那你一般消化冻存一个T75瓶细胞需要多久？我们﹣80冰箱在负1楼，下楼需要一些时间，所以可能是在常温下细胞放置时间长了点。你一般消化三个T75瓶多久呢？
: p( g6 K6 s' b) F0 j7 e( S" N" S6 L* `

懵懂干细胞

回复 huangcong1988 的帖子5 w% S# A1 {& z- l; g. ?

. q2 p$ |3 `# c8 f3 I7 e0 t3个T75的话怎么也要冻存个9管，时间尽量快就是了，我也没有去计算时间，反正就是越快越好了。冻存离心的时候你可以把冻存管盖子打开一起放在超净台里面，而且建议你就是冻存一些没有处理的细胞，等你需要的时候可以复苏出来再传代然后冻存，这样 话细胞量就多一点。所以一般P1、2代的细胞我一般冻存一些没有处理的，到时候传一代就够了，再处理！

wbj1983

回复 huangcong1988 的帖子+ }5 L. U/ o" m; V% `4 Q6 o: l
- h0 b+ |* f& G% |4 w/ E( S9 R  j
至于这个问题有以下几方面的原因可以考虑：$ x$ |- G$ |" Q2 H  ]8 c# R/ w
1、看看分离MEF时是否有污染，因为污染源的生长也需要时间的，所以MEF刚开始长的很好。- s' ]! ]0 P0 }" e: W0 h- G6 X
2、培养基是另一个问题，培养基中双抗可以加到2%的，尤其原代培养，很容易污染的。
0 C  Y/ n( E( s5 m3、培养皿和培养瓶，最好用进口的，国产的身为中国人，虽然爱国，但是在科研领域还是跟发达国家没法相提并论的。
* ]3 J7 M9 f  ?. I6 y; J4、培养箱，看看培养箱有没有污染的可能，如果有，需要处理一下。
; @( G0 J: H8 J) o- j! q6 O5、至于明教，一般用MMC处理后的细胞在明教处理的培养板或瓶里培养，原代培养作用不是很明显。
  A' |/ d1 c6 @& Z; m7 A6 u    以上原因可以参考，有什么其他关于细胞培养，可以进一步交流。

huangcong1988

回复 wbj1983 的帖子
' A- C9 V7 a7 K2 \4 k5 @# `; n3 M: d7 B( x2 i
非常感谢:handshake