MEF刚分的MEF，养了没几天就漂起来了，怎么回事？

水平梦

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谢谢昂  

懵懂干细胞

回复 huangcong1988 的帖子0 h7 F) |- e/ U$ H, K+ y/ ^

9 P( D* D8 J$ p& u! y长满时间没固定的啊，你剪碎分离的细胞比较多，肯定就长满比较快，你分离的细胞少，长满时间就比较长啊。这些都不是固定的，看你的细胞量哦！

懵懂干细胞

回复 huangcong1988 的帖子) [1 m, B1 L3 d8 G$ v- L
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冻存细胞技术你们实验室应该很成熟吧，我们冻存都很简单的啊，程序冻存盒-80一夜，第二天直接放液氮罐了！可能因为你冻存量一次过大，我一般是p1、P2、P3代分别冻存，每次最多3瓶，量太多了，会导致细胞在DMSO常温条件下太久，容易死，要速度！！

huangcong1988

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恩，那你一般消化冻存一个T75瓶细胞需要多久？我们﹣80冰箱在负1楼，下楼需要一些时间，所以可能是在常温下细胞放置时间长了点。你一般消化三个T75瓶多久呢？
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懵懂干细胞

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3个T75的话怎么也要冻存个9管，时间尽量快就是了，我也没有去计算时间，反正就是越快越好了。冻存离心的时候你可以把冻存管盖子打开一起放在超净台里面，而且建议你就是冻存一些没有处理的细胞，等你需要的时候可以复苏出来再传代然后冻存，这样 话细胞量就多一点。所以一般P1、2代的细胞我一般冻存一些没有处理的，到时候传一代就够了，再处理！

wbj1983

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至于这个问题有以下几方面的原因可以考虑：
8 Z. R; I5 f2 k# ?- S9 m1、看看分离MEF时是否有污染，因为污染源的生长也需要时间的，所以MEF刚开始长的很好。
4 Y; Q$ s# G6 U2、培养基是另一个问题，培养基中双抗可以加到2%的，尤其原代培养，很容易污染的。/ \' k% D- ~! s' U, z4 o; a
3、培养皿和培养瓶，最好用进口的，国产的身为中国人，虽然爱国，但是在科研领域还是跟发达国家没法相提并论的。
0 Z& a# [+ Y% a2 o" d9 Y" F, \( Y4、培养箱，看看培养箱有没有污染的可能，如果有，需要处理一下。
. g( O' B0 J% Q0 f' p( s8 Y$ e5、至于明教，一般用MMC处理后的细胞在明教处理的培养板或瓶里培养，原代培养作用不是很明显。
* H+ n$ r. m4 y+ n+ F    以上原因可以参考，有什么其他关于细胞培养，可以进一步交流。

huangcong1988

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8 [9 t) f8 N  @! ^7 j$ h# C' c非常感谢:handshake