MEF刚分的MEF，养了没几天就漂起来了，怎么回事？

懵懂干细胞

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我开始都是按照这个方法做的，没问题，只是我用的胶原酶！消化时间在20-30分钟之间，没5分钟左右吹打数次！！
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懵懂干细胞

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, }0 q( D5 E0 }1 \/ }, j分离出来的都是杂细胞，杂的什么细胞都有，或者是内脏不干净，或者是脂肪细胞，或者是血细胞，或者是其它细胞，不过慢慢的换液传代就提高纯度了，你在分离过程中，第一次离心肯定看到很多很多血红细胞，沉淀细胞中表层好像都是红色的呢，具体黑点是什么？不是很清楚！一起关注吧

gact

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我用的是胰酶，很好做，剪碎了消化，终止消化就好了。

懵懂干细胞

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: x8 u/ @9 I2 O是可以的啊，胰酶和胶原酶都用过，效果都很好，就是胎儿时间，不需要部位的去除，消化时间，剪碎程度，吹打时间与力度比较重要的因素吧！

水平梦

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那你是不是剪碎10分钟？我们做原代是边吹边消化，5分钟左右，传代的时候你用的胰酶浓度是多少啊，我们也出现黑东西的状况

懵懂干细胞

剪碎操作没有要求多长时间，要求的是剪碎的程度，没有明显的组织块，几乎全部都是黏稠的液体，很碎的地步，然后消化，开始是变吹打边消化，然后再放进孵箱消化，最后在终止，离心！ 0.25的胰酶

huangcong1988

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之前几次分的都不错，但是我都没有传代，都是当天夜晚就冻存了，结果复苏都没活。按理说成纤维细胞应该很好养的才对，冻存复苏也应该很简单，但我现在就是养不好，咋办？分的还是不错，但就是没法冻。这几次是分细胞出现了问题，要么是分不出来，要么是分出来以后，细胞大量漂起来，就是不贴壁，成纤维贴壁应该很好才对啊，咋办呢？我这饲养层都制了快两个月了

huangcong1988

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我看那个步骤中分完以后，3~6d才能长满？不对吧？我当晚看，T75瓶就快满了啊，而且如果不换液的话，细胞会死很多，就会漂了

细胞海洋

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* ~- }$ ^4 a* Q$ N( ?$ d看26楼

水平梦

回复 huangcong1988 的帖子; x* [! h( [* u- P# l& |9 B3 ~

% l- c8 u1 P4 y  E2 V! E: \要不还是铺明胶吧，我们全部铺明胶的，