求助！我养的胎盘间充质干细胞状态是不是不正常？

michellejo

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是29号晚上复苏的细胞，因为有一些死细胞所以30号的上午换了一次液，死细胞基本去除了，但是今天（31日）上午，发现又有一些细胞飘起来了，有一些变圆了但是还没飘。+ h/ g. n/ S) N. {7 w- b1 d
细胞上有一些小点，高倍镜下没有看到什么运动的东西，还是挺干净的，也不像有什么污染。最近一阵都是这样，正常培养的过程中有一些细胞变圆，有些飘起来，但是细胞增殖速度没有明显降低。' [. r  F- |* o& Z- ]7 s
我是用10cm 底dish养的，一般是种30-40万，两天半左右可以长到80%左右，然后传代。
1 @+ y% K6 `# R- a$ ?3 g9 D2 ~" _培养基之前是用sigma的DMEM，干粉培养基，用超纯水配的（之前用millipore的纯水仪，后来用的买的超纯水），NaHCO3 3.7g，pH7.1 ，负压过滤除菌；之后因为觉得细胞状态不好，就改用Hyclone的液体DMEM了。血清用的是gibico的南美源血清。消化用的是0.25%trypsin-0.02%EDTA 37度 2min，之后用培养基终止的。
' O; i+ i/ I% o. m养细胞也有一段时间了，但是总是时好时坏的，自己也不知道怎么分析原因。所以想请大家帮分析一下，这样的细胞状态应该是不正常的吧，可能是什么原因呢？7 r+ n( f3 ~1 Y) D. }. H

4 Z+ x( @& D3 YPS：补充一个关于培养基pH的疑惑5 f0 l/ b# c1 B5 \1 }5 A  g
我们养着细胞的培养基pH在7.5左右，我问了一下hyclone公司的技术支持，他说是因为添加3.7gNaHCO3的培养基适用于8%-10%CO2的培养环境，但是我看大多数养MSC都是5%CO2，那我是应该减小NaHCO3的量吗？可是 之前自己配培养基的时候也改用过2g NaHCO3，但是pH还是偏高，在7.5-7.6左右。& e. M( O9 v1 L& a$ n
所以想问一下，大家在养MSC的时候，培养基pH一般是多少，如果可以的话，还想请教一下培养基是怎么配的，加多少NaHCO3，是否会添加HEPES等，过滤前pH一般调整为多少？
" y, s  {- Y: p& F0 S( k, K- @求解答，谢谢~9 k* L+ t$ |# Q# D4 V5 S

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chendongbo338

能否说一下你的具体培养体系，不然很难下结论啊
% J& i1 H7 t: O# t, B你可以再换一种血清，看能否有所改变
4 H$ k: }- F- j! L+ U& C6 {还有就是自己配的DMEM的PH值是否有些高，PH7.2

ditiger

我觉得长得可以，细胞状态挺好的~绝大部分细胞折光性很强，而且照片中显示有细胞在分裂~

luckywen

回复 ditiger 的帖子- T9 z  y0 n% D* R8 w

0 ]2 j# X! }& V" W$ u: ]& W* F你好，如何可以说明照片中的细胞在分裂呢？是那些圆形的吗？

luckywen

回复 michellejo 的帖子
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细胞形态大部分呈多角形，密度略低，继续生长可能会呈长梭形发展。为什么不尝试用DMEM成品培养基呢？含酚红指示剂可以提示酸碱度，省时省力高效，个人觉得性价比较高。

zll200531

我也养过这样的，细胞已经老化，再养养，黑点和多角形 会越来越严重，
; z' T2 y7 \" ]* e) z8 n估计楼主血清不好，可以试试gibco 的msc qualified 血清~

sanna1

应该说你的细胞是正常的。不要紧张，用新配置的培养液换的勤一些，一但长满，穿代时赶紧存一部分细胞在p3p4p5，剩下的细胞该干什干什么。 原代细胞要早用，在p3p4 就应该开始用来做实验了。

flywithiyiy

培养的环境不太乐观，仔细观察图片，特别是第一张，细胞之间的空隙有明显的细丝状物质和其它杂质。正常培养时，细胞之间的空隙应该是干净的，建议将血清和培养基单独培养，观察情况。如果没有这种细丝状物质出现，就可能是细胞的问题。另外，建议先灭活一点血清来培养细胞，观察灭活后血清培养细胞的生长情况。

ind6562

PH应该在7.2-7.4；8 o( B/ s  O( n6 Y8 B7 l/ K
HEPES加2.38克，碳酸氢钠2.0克；* u" z; o; c/ ~  G5 }) ^
你的细胞第二张状态还可以，第一张感觉有点老了，种瓶密度最好再大一点，这样细胞才长得快、长得好。

Jonathan

照片看来，还可以啊