请问我养的msc细胞为什么中间这么多空泡？

fancheng167

回复 细胞海洋 的帖子1 `" U8 s! s+ d# @

& \& n* {; F' ?" b9 ?谢谢版主，知道了

fancheng167

回复 jennyshizz 的帖子1 Q- \3 Q# W4 h0 A: p

1 @& q5 ]& ~7 W4 j5 k: e谢谢回复，我想请问一下你们消化的时间是多少，我是加1ml的trypsin，然后放37度恒温箱里面孵 2-3分钟，另外我想问下如果要终止消化的话，你加medium之前有没有把trypsin 吸干，还是说直接加 medium 终止消化？

jennyshizz

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2 q; v- C* F5 U! C3 Z' R8 a7 b7 }. j$ v3 ^% i
我们用0.25%的胰酶+0.02%EDTA进行消化，消化时间是2分钟，用量是盖过细胞就好；不用洗掉胰酶，因为在消化的过程中，有细胞已经消化下来了，要是你吸取胰酶的话会把细胞吸走，在终止消化之前你可以拍一下培养瓶的底壁，然后加入足量的完全培养基就好

jensn

对于这个问题，我们在培养小鼠骨髓间充质干细胞时也有出现过，总结了一下，可能有以下几个方面的原因：1、原代培养过程中，如果实验动物本身周龄比较大（超过12周的老鼠），本身骨髓干细胞已经状态不是很好了，那么对后面的原代培养就会有问题。同时，在原代培养过程中，如果是用PBS冲洗骨髓腔而不是用后面培养用的培养基冲洗，也会对细胞培养有一定的影响。再者，培养基的血清浓度需要适当提高，一般文献是10%的FBS，个人建议可以提高到15%甚至更高一点。最后，就是离心和吹打混匀要轻柔，吹打过程中，如果产生过多的气泡，一方面使得死细胞增多，另一方面气泡产生的剪切力对细胞是一种刺激，可能会诱导细胞向一定方向分化，而且这种诱导刺激可能在2代之前表现不明显，2代之后这种刺激可能突显的比较厉害。2、从原代培养后第一次传代过程中，主要就是胰酶的消化时间和量的问题。胰酶量的问题，我们一般加1.5ml/25cm2培养瓶，时间一般在2分钟左右，总的原则是宁愿胰酶多一点，时间尽量少一点。对于这时候没有消化下来的细胞，原代的话就直接弃瓶，按1:2的比例传到新瓶中，继代的话，留旧瓶重新加入培养基继续培养。3、后续的继代培养也主要是胰酶的消化掌握，这个只能自己慢慢摸索了。祝好运！

firstaider

关于细胞传代后形态变化的问题，我也说说我的观点：
6 [+ n4 ?" }+ o1、细胞取材来源问题
# }1 ]- |% S1 K5 A& }2、培养基受污染$ [9 b. t: h" u" \# B7 {* D* K: ~
3、操作不够轻柔

pengxuleo

MSC最好用3-5代间的做实验，以后细胞会分化的。9 r; M0 u# |/ s& i& G' N) @, Z
图中的杂细胞可能是血管内皮祖细胞（EPC），MSC和EPC都是源于骨髓的，看形态挺像的

zhanglei1414

明显开始老化了，我们穿20代就基本不养扔掉了，传40代没啥意义