请问我养的msc细胞为什么中间这么多空泡？

fancheng167

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新手，刚刚把实验室里前辈养的msc拿来复苏，然后传了几代，是来源于24M的小鼠的whole bone marrow，请大家帮忙看看为什么我从P4 传到P11，现在的P11形态不好而且细胞中间很多空泡，其实传到P8的时候形态就开始不好了，想知道是我养的问题，还是复苏的细胞本身的问题？再就是可以明显看到其他的细胞，那些是什么细胞？

vanessa

细胞传的太稀和细胞开始衰老会有这样的现象的

dongxin

应该是细胞密度过低，

辛西雅

细胞传代次数太多，吹打时细胞没有完全分散，聚集成片的细胞可能会出现分化现象，也可能是复苏的细胞在冻存之前就已经传代培养太多次数，导致细胞活性不太好

wujh1986

小鼠MSC最好是五六代前就用于实验，鼠的MSC很容易分化的。

fancheng167

谢谢大家的回复，我现在有以下疑问：9 M0 T3 B* W; C& C( u
1.我实验室的前辈说他们用状态好的msc可以传40多代都没有问题，所以我现在很疑惑到底msc可以传多少代？什么时候说明细胞老化了？1 w9 V, q  e" ]+ h
2.确实养的时候我也发现传的密度很重要了，一开始我都是1传4，后来有次长的太快了，我就变成了1传8，甚至1传10，现在想知道如何判断传的密度，到底1传几比较合适？. Z/ w! N2 t' Y0 ^. u
3.不管传几代，中间都看到杂细胞了，很想高人指点一下我，图中的杂细胞到底是何种细胞？如果我再做一遍纯化会有好处吗？

ditiger

有空泡，核仁变大，是细胞老化的早期表现吧

qilan2012

转自丁香园，希望对你有帮助，我们也经常出现这种情况，找到什么原因希望告诉我一声
7 ~& L1 a! k" z2 ?' }) Z+ |1) 不排除轻度污染的可能,重度污染会伴有培养液的浑浊.- b1 Q3 n6 V% t+ R. q& ?
2) 培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大.$ }2 e" h3 a* R: O6 \
3) 还有一个大家易忽略的问题,我从香港一家研机所的资料中查到如果消化细胞吹打时力度过大,产生太多气泡,长期存在也会出现这种现象. 原资料:
6 R) E6 H) i: g1 m! `1 L% |有條紋出現:  局部濃度過高1 l$ v2 {( u: l
細胞剝落:  細胞接種太多,或培養時間過長
6 r/ w, L" Q+ U$ {5 d2 u. SRoller Bottle中有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太快" b; Q5 f* t; o* j; x$ W" u
Roller Bottle僅有單邊有環狀物出現:  振盪擴散轉子速度太慢
3 Z1 t1 a# {$ }, H  q- O5 E+ H泡质有空洞:   培養基氣泡太多
1 z7 i, X' d0 @細胞成黏稠狀:  trypsin(胰蛋白?)處理過久

jennyshizz

这个状态看上去细胞是老化了，我们的MSC一般是传10代左右的是比较适合做相关的研究的，传太多代了容易出现细胞老化及分化的现象；全骨髓贴壁法来分离BMSCs主要是靠传代来进行细胞纯化，所以胰酶的浓度及消化时间非常重要，控制好消化时间及胰酶浓度才能使所需要的BMSCs消化下来而巨噬细胞、单核细胞等一些杂细胞仍然贴壁而达到纯化的目的，我们传代的时候是以1:2的比例进行传代的，胰酶的使用浓度是0.25%；另外，培养过程中，培养条件对细胞的生长也是至关重要的啦，比如血清的浓度及质量，血清的成分比较复杂，使用之前应该做一些克隆形成率的检测方能投入使用，不然很容易导致所培养的细胞状态不佳的

细胞海洋

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' ]6 h7 \2 M4 G' E' s1 i你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样; s+ r- V5 M0 T  G7 X

0 I5 M4 t: n6 ?% c  {+ w& I否则他会看不到/ J9 Q6 f. Y1 ]) ~! `: @- D5 o$ ?

$ A8 F- D7 w  s( \$ k% t0 O或者你重新发个帖子吧