有谁从睾丸组织中分离过初级精母细胞吗？

ying

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; |. [' [: f; r4 N& `- X7 E7 a回复 随心 的帖子. R) y  }% ]# `6 L7 f/ g2 d0 C9 W

/ V! Y( a. w$ P" M0 |混有其他细胞不可以做染色H2AX和Scp3染色吗？反正非四倍体期的细胞都是染色阴性，阴性得非常厉害一点背景都没有的。四倍体期里面粗线期的Scp3非常非常亮，而且H2AX是包裹着XYbody的极其显眼的一团，粗线期细胞绝对不会和细线偶线双线期混淆的。; k# a. u# L$ j) I1 t/ V  F
我的经验是，曲精小管所有细胞一起做chromatin spread比较好做，要是分选成了纯的粗线期细胞，则需要至少10^6才能做出比较好看的图。10^5想做出来需要很有经验和技巧才行。你要是用FACS来分选的话很不容易分到10^6.用重力沉降的话肯定是不纯的，粗线期能有80%就不错了。& v9 @6 W1 b/ s- ^$ ?- V' j6 H2 y5 T
另外，那个给文献的童鞋文献很不给力，根本没看清楼主要什么。

随心

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$ g' H8 q8 l4 ?5 ~% C  G" B! E. h" W多谢，你的意见对我很有用，不过还有一个问题时，因为我的试验样品比如睾丸需要一天内都收完，没有时间每个样本都做spread，睾丸可以冻存吗，有方法吗。多谢多谢

随心

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9 Q" \9 D7 j- }) R就是这篇文章

ying

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% t+ O2 m5 ]& P, J. j你要是取了之后第二天做的话，我建议你先做一下预实验：
1 ~( |6 N7 |; D$ K. W  r% Q+ c将曲精小管大约1厘米（很少）泡在500ul DMEM-FBS-PS里，放在4度。然后你第二天来做spread。我估计是可以的，不会死太多。但不知会不会细胞状态变差使得实验结果不真实。8 M. a4 V! e- O) R+ K- X  Y5 @7 T, }/ P
  V1 A. e/ z' f% ?! i
我曾经将消化成单细胞的睾丸mix细胞放4度过夜，第二天用PI染色，发现比起第一天的大约20%死亡，第二天大约有50%死亡。我估计如果是曲精小管的话死亡率会低一些，因为消化成单细胞本来就会损伤细胞。

ying

其实我觉得你要是能找个助手就好了。助手帮你取，你来计时并且做spread。反正曲精小管要泡在低渗液里面半小时的。

490096812

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/ G7 a2 B4 q, R% S对啊，冻存的话很多东西就改变了，细胞状态也不好，所以还是建议你采来了不要冻存，我们冻存是为了验证冻存后还能用，实际很少用的。你在低温下12小时是没有问题的