关于小鼠成体的成纤维细胞培养的问题

wateryong

我做了3批CD1小鼠成体的尾尖成纤维细胞和两批背部皮肤的成纤维细胞，一开始都能发出细胞，但是传一两代就老化的非常严重。刚开始以为是传代密度不够高导致的，但是后来重新做的传代密度很高了，养了两代依然老化非常严重，不能用来做后续试验。希望高手们能够帮忙解答一下原因，并且有什么解决办法？

小禾禾

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小鼠细胞增殖能力是比较差，但也是能增殖到第5代。可能是：细胞消化过了或培养基成分有问题。

南宫燚岚

在分离原代细胞的时候我觉得主要是三个很大的因素在影响。一是分离时的纯化，一定要把想要组织外的其他组织去除的尽量干净，必要时可以用体视镜分离。二是分离后要尽量保持细胞的活性，不要让分离后的组织泡在液体中太长时间，可以放在冰上，两个人分工合作，一个负责分离，另一个负责后续的消化步骤等，最好不要在取得所有的组织后统一进行后续的步骤，尤其是在分离数量大的时候。三是在消化的时候既不能过也不能不够，这个时间可能需要摸索，当然最好问一问有没有做过相似实验的同僚。9 Q* h- s" q# I& v9 T9 o3 L
希望能有帮助吧！

牙牙丫丫123

问一下你原代培养时血清的浓度？最近你用的这瓶血清有没有换过，你所说的问题可能是细胞营养不良造成的~

wateryong

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5 `, N; D3 j' N% W- X) C" @" a10%的浓度。后来问过老师，也说可能是血清的问题。正在尝试新的血清。

牙牙丫丫123

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建议你可以试试20%或者15%的血清~还有如果你用的是粉末GIBCO的EMEM，最近又恰好新开了一盒，那很有可能是粉末的问题，我们之前遇见过~、( W; c0 m: c( D9 S: @" W; Z. ~