培养上皮细胞

yuhaoze

培养上皮细胞需要螯合过钙离子的血清吗？
. d2 M/ W" }* ~  [为什么需要低钙离子的环境？

xiongjiedeng

      上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。# x! a! ]' I; Z& _6 l
    体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜，因此培养在有胶原的底物上可能利于生长，另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。不同的上皮细胞培养的方法还是有差异的；至于为什么需要低钙，楼主回去看看细胞生物学就知道，不难解释吧* ]! H5 Q0 e* P. D# |; U

yuhaoze

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& D7 K  u3 e$ K. l谢谢谢谢！想问一下您说的这些信息是从哪些地方看到的，我想看看原文，谢谢！

细胞海洋

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" a  h  L. ~+ Z3 E- e$ `9 X- B, I8 f上皮细胞包括腺上皮是很器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。
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4 Y( Z8 \0 s; f- i　　体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜，因此培养在有胶原的底物上可能利于生长，另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生定程度的分化现象。降低PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。 + c% W: f  K" B
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　　以表皮细胞为例，用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞，其法如下（黑木凳志夫 1981）
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　　1、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块，早产流产儿皮肤好，取角化层薄者，切成0.5－1平方厘米小块。 ; f3 K0 E# U% C3 [3 N  {
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　　2、置0.02%EDTA中，室温，5分钟。
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. r3 U* w2 M' V$ M　　3、换入0.25%胰蛋白酶中，4℃过夜。
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　　4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
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　　5、取出表皮，剪成更小的块后，置0.25%胰酶中，37℃，30—60分钟。 9 y, ~1 @+ `# o+ H2 i( ]& ]: q
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　　6、反复吹打，制成悬液。
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7 M) a2 p3 O4 I: Y* O+ X$ j　　7、培养：用80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸去上清。
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　　8、直接加入培养基（Eagle加20%小牛血清）制成细胞悬液，接入培养瓶，CO2温箱培养。4 K5 L6 q+ S* }; \% I4 s

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yuhaoze

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  j6 I& I3 G6 j5 Q! M$ y谢谢海洋哥