脂肪干细胞养不出来

loveless

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balb/c的用组织块贴壁法也没养出来，SD乳鼠组织块能养出来，不知道是为什么。
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xiaoyurly

回复 loveless 的帖子3 ], w2 J7 V/ k% R2 b6 V$ e
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我们实验室一直都用25-30g的雄性C57小鼠来提ADSC，周龄至少在9周以上，2只得到的细胞可铺一个10cm dish，长得很快，而且很纯，一般4-5天可传代，而后2天传代一次。用周龄小的小鼠获得的细胞数较少，需要4-6只才能获得一盘原代，就我们观察细胞活性基本没有区别。balb/c小鼠没有用过，不太清楚。我们的经验就是ADSC一定要密铺快传，这样细胞活力保持的比较好，否则容易老化，另外要用比较好的血清，我们用alphaMEM培养基，20% FBS。

loveless

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密铺快传？要是快的话，细胞还没长到80%。我原代的时候按1:1原瓶传的，P1第2天还感觉挺好的，就是数量不多，想让细胞长到80%传代，结果第4天就老化了~~

sunflower636

回复 loveless 的帖子9 h+ w1 ^1 A4 r) r
0 [* [$ l  N# a; P8 `# z! g4 b
我也摸索了几个月才摸索出来，但是我不是做老鼠的。细胞少可能是因为你的标本量太少，另外胶原酶的浓度没有问题，应该加与组织等量的胶原酶消化，过多过少都不行。后面几步离心那些没有问题。还有我用的是DMEM:F12培养基加10%的胎牛血清。祝你成功。

都市青蛙

你可以调整下消化时间，延长或者缩短，有时候总怕没有消化彻底就消化过了头，也会影响细胞量的

都市青蛙

tangyihan 发表于 2012-10-30 09:28 - _! M1 L& k! }, M7 n2 p9 L
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8 J8 x! M- ?+ `4 a5 E9 e
) x8 ^5 L, W9 c4 Y个人觉得胶原酶浓度也不是太重要，虽然文献上基本都用0.075%或者0.01%的胶原酶消化， ...

" n: ^5 d* _' F& V# W1 \" g8 G配的浓度不一定必须一样，工作浓度合适就行，关键还是要掌握好消化程度和时间，不能机械地规定消化时间，还是要因材料灵活掌握消化状态和时间的

danieldan08

脂肪少了，最少3ML

liyujuanmarry

1、很可能是你的脂肪量太少，得到的细胞太少，如果细胞的接种密度过低，细胞间的相互作用就达不到细胞生长所需的水平
- j' a; l4 H6 _; `2、可适当延长消化时间，尽量将脂肪消化完全，以获得更多细胞4 `( a2 C- x" Z
3、一般情况下，0.1%的I型胶原酶浓度应该是足够的了

lcw918

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5 b( L" N5 F' V5 _$ P: o9 G
% r2 ?9 y% s& S: r) E# s# E没有水浴箱？最好是在37°水浴箱里面摇荡，因为这个温度下酶的活性最好，效能最高，温度的改变对酶活性的影响，最终的作用效果可不是一两被的问题。再者，消化时间没必要完全按protocol的，你看消化成绒绒絮状，乳糜一样，就可以离心了

loveless

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5 }) s8 G3 x% H
1 U. X7 b1 P' p& r 我想问一下，如果传代细胞数少的话，细胞还可以长满么？还是说就不长了，或是老化了呢？