干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 17188|回复: 3
go

[请教] 如何设计一个实验? [复制链接]

Rank: 2

积分
149 
威望
149  
包包
75  
楼主
发表于 2012-10-9 11:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
前段时间通过蛋白、mRNA水平检测得到转录因子A正调控基因B,因此猜想基因B是转录因子A的靶基因。现在准备进一步探究与证明转录因子A调控基因B的分子机制。如何样设计一个比较完美的实验,想集思广益,各位大侠指点指点。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
328 
威望
328  
包包
137  

优秀会员 金话筒

沙发
发表于 2012-10-9 15:16 |只看该作者
in vitro,在细胞水平上,转染Knockout A基因的细胞,检测B基因的mRNA的表达量与对照组是否有差异,如果有,可以推测A基因是B基因的上游调控因子;再者,可以通过加入A基因的反义核苷酸后检测B基因的mRNA 的表达,如果出现B基因表达下调,也可以从一个角度说明A基因靶向调控B基因。再knock out B基因,看A基因已知的效应因子的表达是否有差异,如果有,说明A基因的已知下游效应因子是通过B基因来介导的。这就可以说明其相互关系了。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 10 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
61 
威望
61  
包包
210  
藤椅
发表于 2012-10-9 15:48 |只看该作者
学习

Rank: 2

积分
149 
威望
149  
包包
75  
板凳
发表于 2012-10-10 10:32 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 jensn 的帖子
" w/ }  i3 `0 x- Y3 I" o+ E4 W/ c
您所说的第一步,分别敲除和高表达A基因后检测B基因的mRNA的表达量,已经蛋白表达量我都已经做出来了,并且得到预期结果,转录因子A确实可以上调基因B;现在的问题是想从分子角度证明他们之间的直接调控关系,估计得做启动子吧,因为还有一种可能就是A、B之间存在第三个基因。至于后一步,感谢大侠,可以完善实验结果和数据,我会认真设计做的
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 15   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-11 03:04

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.