如何设计一个实验？

xiongjiedeng

前段时间通过蛋白、mRNA水平检测得到转录因子A正调控基因B，因此猜想基因B是转录因子A的靶基因。现在准备进一步探究与证明转录因子A调控基因B的分子机制。如何样设计一个比较完美的实验，想集思广益，各位大侠指点指点。

jensn

in vitro,在细胞水平上,转染Knockout A基因的细胞，检测B基因的mRNA的表达量与对照组是否有差异，如果有，可以推测A基因是B基因的上游调控因子；再者，可以通过加入A基因的反义核苷酸后检测B基因的mRNA 的表达，如果出现B基因表达下调，也可以从一个角度说明A基因靶向调控B基因。再knock out B基因，看A基因已知的效应因子的表达是否有差异，如果有，说明A基因的已知下游效应因子是通过B基因来介导的。这就可以说明其相互关系了。

食毕莫饥

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xiongjiedeng

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: x5 B% c8 n* j' i7 K) A1 V, C! O+ m3 e+ O: t  P, Y6 Z: |1 E# n
您所说的第一步，分别敲除和高表达A基因后检测B基因的mRNA的表达量，已经蛋白表达量我都已经做出来了，并且得到预期结果，转录因子A确实可以上调基因B；现在的问题是想从分子角度证明他们之间的直接调控关系，估计得做启动子吧，因为还有一种可能就是A、B之间存在第三个基因。至于后一步，感谢大侠，可以完善实验结果和数据，我会认真设计做的