人脂肪干细胞培养----为什么总出现内皮细胞！

hanchao

本人最近提取过N个样本的人脂肪组织干细胞，但不知为何，出现过3次贴壁细胞为内皮细胞，并在3天换液后，内皮细胞增殖达100%融合。无奈啊，无奈啊。方案如下：请哪位专家给分析分析。。。8 T; I% S$ r& W; _. j$ b, r
1. 获取脂肪组织来源不定，多数为癌旁组织
9 q. a: Q+ F# T6 Z1 F: g. {& W2. PBS冲洗
0 v) f7 U  o" u/ T3. 脂肪剪碎为3*3*3mm小块/ z4 P9 N& i7 n6 @  |9 N
4. PBS冲洗至溶液为无红细胞的澄清色
. y7 _7 s9 w* y! x5. 弃去PBS: q7 L0 m" L! g* C
6. 加入与脂肪组织等量的0.1% I型胶原酶. T! i$ Q9 L/ V! R/ o; u
7. 37度水浴190转30min/ \7 X, h. \# w6 t+ d; u9 F9 @9 ]
8. 加入等量完全培养基种植消化
& ^6 L6 U2 N' F& x& q0 u6 N9. 1000转10min离心
; I9 a" ^% `" y: s0 G2 d10. 弃去脂肪组织及上清' q& c) L1 @7 n* m
11. 加入5ml完全培养基重悬细胞
" r1 m8 Q) l0 {/ G# R* r, t12. 1000转5min离心
* M7 ?$ T: r$ |1 t13. 去上清，加入完全培养基（H-DMEM+10%FBS+1%AA）
7 u$ h5 d! X; Q1 \) {, y14. 大约5ml脂肪组织接种25cm2一瓶。
8 t& ~" q7 \' W15. 第2或3天观察，就有少量成纤维状细胞贴壁，但仍有少量圆形细胞贴壁3 z! X* J  ^1 B+ J. X7 O
16. 待3d换液圆形细胞大量扩增1d即可长满。。。我晕啊。。。我晕啊。。。我哪错了。。。2 l% |& _0 ^; j% l# C- l
17. 经上网查询扩增细胞为内皮细胞形态。
% _  i1 h2 g. C- G( c哪位专家给我看看。。。为什么会这个样子。。。。。。。

细胞-77

有图片吗，可以传点图看看是什么样吗？

hanchao

有图片有图片。。。

hanchao

回复 细胞-77 的帖子
% d! D! ^+ S5 i2 u/ Y
7 c: o! t! P4 n+ |) A' z$ M有图片。。。请欣赏。。。

jihaijie

来源有问题吧

willing

组织尽量去除血管后再剪。0 @3 m8 ?( w$ [

% R& y( M& J# e$ ?8 b/ k9 s! Q

ditiger

回复 hanchao 的帖子2 ?, ^9 L, n" \2 ]7 U

" V( a5 F- R; N% Q) @' f, D; KLz用的什么培养基？内皮细胞一般不好养的。。。

干细胞谷

怀疑你培养出来的是肿瘤细胞，换换正常脂肪组织试试。

wind789

脂肪干不是这样的。你是不是培养出肿瘤细胞了？

future007

我觉得还是来源上有问题，可能混进去上皮或是内皮组织了，不能选个别的部位吗？