人脂肪干细胞培养----为什么总出现内皮细胞！

hanchao

本人最近提取过N个样本的人脂肪组织干细胞，但不知为何，出现过3次贴壁细胞为内皮细胞，并在3天换液后，内皮细胞增殖达100%融合。无奈啊，无奈啊。方案如下：请哪位专家给分析分析。。。% D( C6 {' n9 Q1 L% T3 A" N# {
1. 获取脂肪组织来源不定，多数为癌旁组织$ L& {$ G. B) S8 l
2. PBS冲洗9 N5 ]4 x; x3 C" u- g9 u! K6 r
3. 脂肪剪碎为3*3*3mm小块
- M, |. O+ I  n+ f4. PBS冲洗至溶液为无红细胞的澄清色
2 B- Y' l8 p: ?) J( {7 q6 I5. 弃去PBS
. n6 ]. Q3 J0 z' H6. 加入与脂肪组织等量的0.1% I型胶原酶
6 g8 D$ I9 o* t0 H. e7. 37度水浴190转30min
* }% i8 C& m- a& S( B  U8. 加入等量完全培养基种植消化9 ^1 t  B, K. ?3 P' @+ M. i
9. 1000转10min离心
9 B4 A0 `- K0 w0 B3 u10. 弃去脂肪组织及上清
, _* X3 |+ p: j; M' Q6 U! p% {11. 加入5ml完全培养基重悬细胞
6 W" Y& n) p! ~+ x& Q' q/ w, q/ b2 Y12. 1000转5min离心
1 ]. g5 x, b( |" Y) e7 ^: h13. 去上清，加入完全培养基（H-DMEM+10%FBS+1%AA）/ N- X' v! {4 W7 `( M; P4 ~, U6 n
14. 大约5ml脂肪组织接种25cm2一瓶。
1 d4 B% _( g2 S, D) }' J15. 第2或3天观察，就有少量成纤维状细胞贴壁，但仍有少量圆形细胞贴壁$ S  w& S! M) I% U( O: {! J5 @, i
16. 待3d换液圆形细胞大量扩增1d即可长满。。。我晕啊。。。我晕啊。。。我哪错了。。。
, c) I. J. U% }; C# ~17. 经上网查询扩增细胞为内皮细胞形态。
; C5 |' O: C' `6 e- v/ z5 x6 o哪位专家给我看看。。。为什么会这个样子。。。。。。。

细胞-77

有图片吗，可以传点图看看是什么样吗？

hanchao

有图片有图片。。。

hanchao

回复 细胞-77 的帖子, j8 T3 P/ H  `& `' X" `) G. z

/ d2 o9 x. W& o' g: v有图片。。。请欣赏。。。

jihaijie

来源有问题吧

willing

组织尽量去除血管后再剪。
- d" N. \4 ?: n" ~4 O5 a' j1 [% F' t' l! E$ S

ditiger

回复 hanchao 的帖子( ]- u3 {" L) }4 ~  H+ v

! s5 O$ |# B, SLz用的什么培养基？内皮细胞一般不好养的。。。

干细胞谷

怀疑你培养出来的是肿瘤细胞，换换正常脂肪组织试试。

wind789

脂肪干不是这样的。你是不是培养出肿瘤细胞了？

future007

我觉得还是来源上有问题，可能混进去上皮或是内皮组织了，不能选个别的部位吗？