关于干细胞染色体核型分析的一些问题

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子
& U" |2 Q3 Q$ b
, Z2 Y; K" r) m/ Q8 b利用热涨冷缩原理，载玻片事先放盒子里，在滴片前都是放在冰箱里，你滴完片，是要先封片的 ，观察一下，好的留下，不好的丢弃。即使你用软件进行核型分析，也会在处理数据时删除一些细胞图片的，不是每个图片都利于核型分析的。

labghost

回复 突击兵之小土豆 的帖子  W/ Y* x+ Y( d0 k6 q

4 `9 _+ V* ~4 C5 R) W要是再有点氯化钙就更好了。

labghost

将近一米的告诉滴下去，把一滴液体滴在一个载玻片上，7101,7102都在10cm²左右，能那么准，这技术真不是一天两天三四五六七天练出来的哈。

突击兵之小土豆

回复 labghost 的帖子# c1 B1 }/ _2 b; B% P$ S5 h  o
  O6 E! ~9 p; G& s& C$ j" d
氯化钙 我们倒是没加过   很多东西没大家想象的那么难  我记得我们小时候玩弹球  就用弹球拿起来 点射别的弹球   个人表示无压力  小时候玩弹球很准的 哈哈

184lj

只做过体细胞的核型分析，取对数生长期的细胞，终浓度0.4ug/mL秋水仙素处理2~3h；KCl低渗液处理；3:1甲醇病乙酸固定液固定细胞；调整浓度 滴到-20℃冷冻的载玻片上（高度50公分就差不多了）。

cartoonyang

- d* X: m" c: Z2 ~+ M( ^
; e( {. q7 D2 Q2 }
很好的帖子。
( `+ Q7 C. u7 d5 P2 X" H" }  c我之前做了很多体细胞的核型分析，分散效果一直不好。我在想，可能当初我没用预冷的载玻片有很大关系。
3 L, V; ~. Z9 L5 G/ r谢谢分享！！！

cartoonyang

Briefly, actively proliferating cells were incubated with colchicines (0.1 lg/ml) for 4 h at 37 _C. The cells were washed twice with DPBS, trypsinized, suspended in a chilled hypotonic solution (68 mM KCl) and incubated for 20 min at 37 _C and then fixed for 10min in chilledfixative (methanol and glacial acetic acid, 3:1). The pellets were suspended in 5 ml of chilled fixative for another 10min. The metaphase spreads were prepared by dropping the cell suspension onto ice cold glass slides. - T" ~0 O" Q; Z# m- ]; ~9 v4 O6 d

/ \+ q0 s' d- W4 {3 {: C& t" Q网上找的，我准备用这个方法试试。供分享！