关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：/ v- B; t/ D* F
1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
/ t- Y0 N3 z8 e, X2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
9 {! L  k. ^* b1 `& m求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞
4 t' q( t( s* t9 ~! \, }. L5 M           2细胞低渗处理方法如何优化？
0 C3 N$ ]  Y5 A6 X. H谢谢各位i！

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素  h; h, I7 B3 Y2 q3 Y: J
2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。
: \; n: j) C) h8 Y' a' ]我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

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6 P$ |$ _5 Q" t: f2 D) P# ]0 Y
' D7 b0 B7 m( ~% H. X; ~# O* \! C嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

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- y9 y" l) d. W. ?: P, Q
     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

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4 Z/ N9 p4 {: m: L: h3 u4 b; u
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

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7 l( j5 ]; H* k& W6 o, m& B, D. }( t: \% f: D9 n% o
7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊
) w; F& G& J) K' }5 [" z
# B2 }& o- E7 O' f+ |) {) P这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

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) ~5 T5 R$ `" l  o70CM   打错了   

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- ~5 L' `5 b2 a! j2 D) ~. u# K1 @. m" m% K! p- m4 T
70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧