关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：2 Y5 K  z; f" q8 x2 w* m* `6 T" y
1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
" R/ D# _. E: ?7 g* V% o2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。. i7 M' ~4 _/ R4 P8 Z
求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞$ C+ V" X' Q. F- j% W
           2细胞低渗处理方法如何优化？$ l4 M( O. a3 L" o/ a& f  h
谢谢各位i！

SKC-SFC

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素
( Z$ d/ J% _" o" L5 W8 [2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。
( G1 {* U7 b0 G, E# s我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

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回复 xbs530515 的帖子$ y* k* g  T: I* ?9 `

2 u8 l. h1 c6 [9 A9 \嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

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$ J; P5 r, a3 |" I! V3 P- _2 O$ A; `7 u2 q" p6 x: N
     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

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回复 突击兵之小土豆 的帖子4 y( Y+ a+ \' K: L
4 \6 o" ^( Y* ^% p1 V5 G* A
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

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6 h. i  I3 F8 Z" f" ^3 s5 b/ Q) h, n9 \! g$ l1 E
7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊
0 Z1 g. S. j8 X: n- m# R$ b1 w/ F+ Z1 d
这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

回复 突击兵之小土豆 的帖子. f5 a. V! B& V0 N% H

6 v& m$ r4 Q* j  _2 l& b, W7 X70CM   打错了   

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回复 突击兵之小土豆 的帖子4 F7 b" [( _. ]$ R1 l* I; G5 A  ^

& A7 A0 R- B$ y4 j# C' r3 d70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧