关于干细胞染色体核型分析的一些问题

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近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：
1 [% Y7 A! X, t4 V1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
  y5 h, m6 X0 E( c; M( e" K2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。, B8 e  M$ A8 H6 N6 @
求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞& G, \' C8 P  r" o
           2细胞低渗处理方法如何优化？
9 T6 ]0 s; J5 B  v1 u5 e. y谢谢各位i！

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突击兵之小土豆

1、用秋水仙素
7 {/ V4 L2 n9 z( q2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。
& V( E' t+ F6 [, G我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

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7 [! H' {' ]' K6 ?9 Y! g
7 f8 i8 |( l* L嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

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- A& Y6 r- d8 G9 _2 b% z5 E' O8 p
' S) }6 L/ l' V( }     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

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回复 突击兵之小土豆 的帖子2 \% U( j+ P* W3 h0 n

6 A5 Z  g$ Y4 \0 b$ F5 ~0 ^嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

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. G; X! a8 `5 y. ^1 l8 j. [7 W3 l" q. z7 f: t$ [: ^
7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊0 O) D2 C5 q6 Z* o/ Q4 a0 I& c
. h3 e! M& Z" L) e# m* e- }3 D* E6 i
这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

回复 突击兵之小土豆 的帖子" T: L2 d6 Z- r0 t0 i- i
9 A5 y+ Q: s" I5 ~' N. K
70CM   打错了   

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# X# E7 c: a. d9 `
6 ]8 d. C  |1 G; H+ b9 c$ k70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧