关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：, _0 Q- o; v, G# ]: r! m
1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对8 G& ~2 N' t" X
2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。: {9 o& `5 e7 N" ~) |* u9 k
求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞( n" d' K* n2 ~& X
           2细胞低渗处理方法如何优化？( W: n' e! j5 ^
谢谢各位i！

SKC-SFC

顶起

突击兵之小土豆

1、用秋水仙素
* h3 L% f4 f" b( v4 f2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。
9 j6 a7 L, ]' t3 D4 h我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

SKC-SFC

回复 xbs530515 的帖子+ A3 ~+ R+ |) t+ r, @. q

/ `. Q& b5 _, W7 c嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子
/ g4 [+ x2 y) W$ k& p& Y- s" Y6 ]
     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子
0 E4 x1 K) A" J! Z) ^' t, P3 a# b/ _6 r, V! ~# r2 ^% P
嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子. g/ v& z! R9 ^7 Z: g6 N7 h, A
2 h3 c+ @3 F% [& X- }. L
7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊, N1 v. c) P7 U2 Z4 a

3 W3 ?' w* [: Y+ c* H) I这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

回复 突击兵之小土豆 的帖子0 ^7 |( d4 g) ^5 {9 }
2 S' t6 w# J5 F* t
70CM   打错了   

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子& x7 }, Z. d% h* }1 S. v$ Z# J

1 {4 W8 ]& C6 `) C& ~# l3 h( u8 t70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧