关于干细胞染色体核型分析的一些问题

SKC-SFC

近期在干细胞染色体核型分析前，在制备染色体的时候遇到以下情况：6 H) d) Y3 E, p& D
1 .不知道怎么选取细胞，过早则看不到任何染色体形成，太迟形态也不对
# z& F) ^4 A6 N1 ~$ I) ]2 .最大的问题在于低渗处理的时候，没有办法破膜。
6 r1 L* h: o8 D求助：1.如果选择用于制备染色体的细胞
9 {0 Z! I% C4 V# {/ C7 ^           2细胞低渗处理方法如何优化？. i. ?8 {4 g* f  I6 ^
谢谢各位i！

SKC-SFC

顶起

突击兵之小土豆

1、用秋水仙素
$ J/ w5 f8 ?7 g1 j2、自己配低渗液，KCL好像是

xbs530515

选择的细胞，必须在对数生长期，这个就要根据你的细胞本身的特性，以及接种的密度都有关系了。你可以考虑一下取24h，和48h的比较一下，一般细胞都是这之间。实在不行的话，估计就要做个生长曲线来确定一下你的细胞的对数期。3 c4 m& ^) P! O7 \; ?! U
我认为你第二个问题也是因为没有选到对数生长期的细胞造成的，一般的话，低渗还是比较容易。你做个梯度，20min，30min，40min试试看，一般也就是30min就行的，所以，还是应该摸索一下你的细胞的对数生长期才是最关键的。

SKC-SFC

回复 xbs530515 的帖子) E! k7 Y. M7 F5 E6 O

1 H% `5 l; h+ n' e嗯，说得有道理，第一次有40%的细胞是可以看到分散的染色体，形态也很典型，固定和染色都不错。但第二次的实验结果失败，选取的细胞是36小时的细胞，低渗和固定后看到的细胞里看不到染色体的存在，低渗的话应该只是胀大，并不需要细胞膜破掉，我用的是KCl0.075M，作用时间为30min，秋水仙素的使用浓度为终浓度0.45ug/mL。

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子
+ C$ d- z% Y5 P! D) f4 x& J, F
$ y, [! T0 l' _     能看到分散的染色体，关键是滴片，注意利用热胀冷缩，具体方法不透露了。只要掌握好距离滴片，一般很容易的。

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子$ H% S3 g5 A0 Q) m' Y* Y  [; L

. [3 }' q, D% Z& ^嗯，说得很对，不过距离太高貌似滴不准

突击兵之小土豆

回复 SKC-SFC 的帖子
1 X; k' o+ s: E/ |' \# h: n) m. k$ O' X* w# Y) Z
7cm左右吧，一手拿吸管瞄准，一手拿冷的载玻片（注意要有雾气，没有立马不要），瞄准，然后快速滴，不管滴的怎样，快速滴20个板，最后画圈，用松脂封片（我个人比较喜欢松脂，本来还想手工做个琥珀呢）。熟能生巧，多练就越来越准的。加油啊" o$ Q: B) P0 k! d# Y0 {0 ]

# m6 ^1 Y0 b4 g; d0 \" ]这个方法是老师傅的方法，不外传的，我说了。一定要给我很多威望和包包啊，要不对不起我啊！！

突击兵之小土豆

回复 突击兵之小土豆 的帖子. R: F% p& i. x  x
  z! L0 {5 B- ^& Y. }8 y& k* B; r
70CM   打错了   

SKC-SFC

回复 突击兵之小土豆 的帖子! b8 H1 @/ S7 K9 v
- n& g; v' W# b, s7 o7 n6 p4 B; g8 m7 a
70CM 要滴准，那技术得多精湛呢，而且滴片还是应该先滴一片，看看大致的细胞密度吧