种板时如何让细胞均匀

ind6562

大家好，我觉得我养的间充质干细胞物别容易抱团，所以消化并重悬后都争取尽快种板，但一直解决不了种板后某些孔的细胞较集中（主要是集中在正中）的问题。因为孔很小（96孔板），感觉摇晃的方法不怎么管用。之前试过用吹打的方法，貌似还挺管用，但吹打产生的气泡又导致培养液容易蒸发，而且听说容易污染，所以后来也不再敢吹打。9 o. Y! b7 U' ?1 s4 E
请问各位大侠，有什么高招可以让我种板的细胞分布得均匀些？

wujh1986

将你要接种的细胞用相关培养基稀释好后,转移到EP管中，可以用手指弹几下弹匀，然后用枪头吹打，接种，每接种两三个孔，再吹打混匀，再接种。。。。。。。

jun8013

混匀后，沿侧壁快速加完试试

yaolinzhang

可以先上下混匀，后左右混匀；或用腕力振荡混匀（类似涡旋）

zhusealin

孔比较小的板子，比如96，24孔可以用拍打板子四周的方法来混匀，细胞还没贴壁的时候，孔里面的液体不要太多

ind6562

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5 q! S3 J# E$ _) u6 u: B% d2 g' c, S请问96孔板加100 ul可以吗？

huangcong1988

我接种都是中间稀四周密，因为孔板设计都是中间凸起的，所以一般细胞会滑落到较低的四周，接种之前细胞混匀是必须的，然后就是接种后尽量不要使劲晃动，一晃动，四周细胞就密了

zhusealin

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可以的

Donnies

一般情况细胞铺的是否匀，关键是看你在未铺板之前细胞再离心管或EP管中是否已经混匀，然后再铺到板中，铺板的时候要集中注意力，不要晃动，另外一个是每次铺几个孔，都需要再次混匀离心管或EP管中的细胞，铺完之后静置3-5min，再放入孵箱中，放到孵箱时动作要轻慢。希望对你有帮助

weibin2002

我是混匀后，没加一个孔就沿着管壁吹轻轻洗一次，放入箱时再前后左右轻轻晃动一下培养板，千万不要斡旋式晃动，感觉还可以。