第一次做MEF，细胞杂乱，出现多种多核细胞，请高手指点

fwj81

第一做MEF，是选的E10.5天的小鼠，可能取得时间太早了，头部未分离干净。不过内脏已尽量去除。有很多不明白的地方，请高手指点！直接上图。
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; E% E- |! B. G$ k$ ~* [7 u第一代MEF细胞比较杂乱，第二代就好多了。! Z# l" ~2 `7 S

. k3 e) z$ m+ P0 }: I6 ^6 d第一代细胞培养到8天时，出现很多双核及四核细胞。实验室有人说可能是正在分裂的细胞，看：一个正在变俩。可是感觉这种说法颇为不妥，不知道真实情况是怎么样的？
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第二代细胞培养两天后，发现有很多细胞胞浆里出现很多空泡，不知道是不是正在濒临死亡的细胞。反正继续培养了两天，这种细胞变少了，成纤维样细胞开始越来越纯了。1 y" a8 u0 U" m; ~" H  d
请高手帮忙分析一下细胞培养情况。

mqz_11

分的细胞少呀。。。消化的不好。接种的细胞量少。/ r5 {; _- G& c( a- c5 w& t
优化一下消化步骤，铺细胞是在1-2个胚胎一个10cm dish。。效果会好一点。你可以做12.5-13.5天的，，胚胎大些，好操作。细胞得率也高些。。

nydfy

1.用于ES细胞滋养层的MEF需选用12.5D的鼠胚，其它用途的可以用13.5D的；
6 Z2 I: E" |7 F' f4 p. ]2.需要去除头，四肢，内脏；% _% L/ _& F3 U- v+ c/ U9 N
3.从第二张图看，你的MEF还是有好细胞的。

fwj81

回复 mqz_11 的帖子- @" y9 P, \5 T( U: P' b/ l+ c2 L
6 z) r# O) j7 d4 P9 m$ {, ?
{:2_27:}:D是的，就是分的太少了，消化的时间不够，谢谢指点！

huangcong1988

加了多少酶？消化时间多长？还有就是胎鼠太小，分出来的细胞就很少，这样分装到T75瓶里的细胞就很少，不过还是能长起来，这个细胞长得很快

franklinhg

哦我们分离MEF是直接研磨去除了大脑，内脏及四肢的胚胎， 按照2-3个胚胎接种一个150mm的培养皿，24小时后全量换液，大约在第3天可以传代。

第一心音

这个不能用

fwj81

回复 第一心音 的帖子9 m6 [5 m" r! i) ^: o' _
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请问为什么？请指点一下。{:2_31:}

your1024

上一个问题是因为就图片来看，细胞量不够（不过可以长），最主要是细胞已经开始扁平，状态不是很好，用来做滋养层的话效果也不会很好。细胞应该是第二张图片上半部分那种形态算是比较好。