DC成熟后是不是这样？不成熟的怎么处理！

kiss2346

一般5-6天加TNF-a作用30H以上，成熟的DC会变圆，有一部分会变成悬浮，一部分不太容易下来，剩下的细胞如果不符合DC的细胞形态标准，不要也罢。如果是DC样的话 就尽量都弄下来吧，可以考虑4度的冷盐水吹打，或者用盐水放置一会再吹打，刮刀不建议。

lyj-0017

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! l' i0 w2 }1 P# Z7 d. P& v
同意你的观点，不建议用细胞刮刀刮细胞，这种机械性刮取细胞可使DC表面抗原收到损伤或损失，如果收集的细胞是用于个体治疗或者做基础功能性实验，其效果也会受到一定影响。

lyj-0017

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说实话，虽然我们都清楚DC形态具有许多树突，但是实际在用一般显微镜观察时，我们观察到的DC并不像一些图片上所画的一样，所以我认为单凭细胞形态标准来判断是不是DC从而决定要不要这部分细胞并不可取，倒是可以选择用无酶的冷的消化液多消化一会，再多吹打一会

kiss2346

回复 lyj-0017 的帖子8 L% O8 `* c9 ^" X$ l, `

2 e5 i0 `& p4 T& J' Z确实 通过形态判断不准确，一般而言也不会这么做。但是那些贴壁特别牢固，形状不规则的 基本上都不是DC了 ，那部分我一般都不要了 。既费时费力，而且还可能是杂质细胞

sunny.yc

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可以不用4度冷盐水，换做4度预冷的DPBS或者1640吗

sunny.yc

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9 Q/ H6 q& g! a3 h
: y8 c' S5 S' y% W8 Q+ A可以不用4度冷盐水，换做4度预冷的DPBS或者1640吗

kiss2346

回复 sunny.yc 的帖子4 ]( w/ p- d8 z2 p$ W

! J* ]: u% Y6 l# [. v0 M5 X9 o这个我不是很清楚，我们用的量比较大 所以一般都是用生理盐水来做   你说的那两种我都没有用过 不好评价

sunny.yc

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/ G' t- ?9 J, N, c& Z9 c, w" w) ^0 c7 a8 X  R, O% E! x
好的，十分感谢！！那你们DC细胞离心的话，转速和时间都一般控制在多少呢？

kiss2346

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. q4 l$ l$ u$ F
+ A1 R: Z) ]2 k. `- G" a转速1200R/MIN  10min 就可以    一半都是能够收集多少收集多少，尽量多收集

天天天雨雨

DC成熟后是这样的，加TNF-a刺激成熟后后第二天就会悬浮起来，贴在壁上的悬浮细胞我们都不会刮下来，使劲吹打，吹不下来的就直接弃掉了。
/ F5 }  O' D, {% ~& Z另外，并不能确定贴壁的细胞就是DC细胞吧,DC贴壁贴的并没有那么牢固。