间充质干细胞原代消化相较于传代是不是更不易消化些

caiyu07248

最近一段时间培养间充质干细胞，发现细胞原代培养长满后消化，细胞不是那么容易消化，基本上需要将近十分钟，细胞胞质才有回缩的迹象，而且还需要用枪使劲吹打细胞才能从壁上掉下来，传代后细胞贴得也不是很好，很多细胞漂起来了，不知道是不是消化时间长的关系。! A8 }; S7 p6 H2 a/ J" z
但是传代培养时进行消化，2-3min细胞胞质就回缩了，稍微吹一下细胞就都掉下来了，用的消化液都是一样的（和原代细胞消化是一样的消化液）。不知道大家有没有遇到类似的情况，我在想是不是原代培养时，细胞贴壁更牢，不容易消化呢。请大虾们赐教！！

get0715

不太清楚你的原代细胞是如何获取的，是组织块法还是消化法，不过看你的情况可能是消化法，个人认为你说细胞长满了才进行传代时间有点晚，回合到70-80%的时候就传代试试吧，分离得到的细胞应该不完全是间充质干细胞，应该有一些杂细胞，如果大部分已经开始回缩脱落，那些没消化下来的多数就不是间充质干细胞了吧，你可以试试把后消化下来的另外培养，流式检测一下是不是间充质干细胞纯度低了，因为我还没真分开这么做过，只是很少数不好消化的就丢掉了，给你一点建议，仅供参考哦，希望对你有帮助。

zhujiang007

“细胞原代培养长满”不知道是什么意思。在原代只能看到一个一个集落，集落有大有小，如果要等到长满了，细胞恐怕老的很啊。原代的确不如传代好消化，因为杂细胞很多，非MSC消化不下来，只有这样一次一次传代，MSC才能得以纯化。

caiyu07248

回复 get0715 的帖子; q8 a( s' M+ O1 \2 O
7 y9 Q6 m: b+ W" D! o
谢谢！嗯，我试试！

caiyu07248

回复 zhujiang007 的帖子3 z3 @8 G1 H2 ]) y

, q0 s" _8 H) y" `  B我用的酶消化法，基本上细胞都能均匀地平铺在皿底生长，等细胞最密的地方融合率有80-90%时，进行传代，并没有让它所有地方都长得很满。

huajie881026

建议不要用酶消化法，细胞损伤太大，我做过比较的，组织块法明显细胞状态要好很多！

caiyu07248

回复 huajie881026 的帖子1 ^/ Q: x4 @' M+ G

! `7 d7 t8 U) w* k# ^* ^2 t好的，受教，我试试！

lql2006wh

不要让细胞长太满了再消化，这样影响消化，对传代后细胞的状态也会有很大影响。4 I! z3 y+ {$ T& F3 ]0 r( @3 D3 [
我们原代、传代细胞的消化没感觉有差别。

willow0711

回复 huajie881026 的帖子, ~+ ]4 R7 a8 F& b

: c% P0 V/ F& U. J请问你组织块培养的原代，在集落多少或多大的情况下传代的呢？

mbpsky

你的是什么组织的间充质呢？不同组织的间充质消化速度和贴壁能力是不同的。如骨髓间充质、脐带间充质、羊膜间充质。原代制备也是大相径庭，骨髓间充质培养原代培养较为简单，我们一般使用全骨髓培养法，隔天换液，逐步去除，细胞接种也较之均匀，大约80%汇合传代，需5~7天;而脐带间充质原代培养就可分组织贴块法、酶消化法和混合法，组织贴块法所需时间较长大约9~12天，酶消化法对细胞损伤较大，原代制备时间也长，细胞产量也不稳定，成本也高，做的好的话细胞生长较快，大约5天能传代，若密度合适的话。混合法就是组织剪碎后再继续消化，效果最好，生长期也适中，产量也高，细胞形态也好，推荐这个；羊膜间充质最麻烦，一般用也是酶消化法，消化时间也较长，产量较低，羊膜间充质接种密度要大，原代细胞生长快，但是容易老化，整个细胞较为宽大，贴壁能力较强。消化时间最长，大约需要5~8min。这些是我这些年做间充质的经验，仅供参考。