关于肿瘤细胞球蛋白的提取

cxscxs

无血清悬浮培养肿瘤细胞球，如果球养出来了，想提蛋白做WB，提蛋白的时候如何把细胞球与周围散在的单细胞分离开？还有，需要多少球才足够做WB？请有经验的前辈多多赐教，谢谢

linhua188

同问题啊。。。啊有人回答呢
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李夏

我也好想知道这个问题啊，求高手啊9 A2 `; f  @; D2 x# a$ S

jack0811

我一般是400g离心10分钟就可以把球离下来了,然后再做后续试验

cxscxs

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4 }6 S2 |% ~8 O0 R单细胞不会离下来吗？

cxscxs

就这么沉了？求助啊，大家球养出来都不做WB啊。。。

617507911

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+ b3 A, S. g, p" Z9 ]: j# i' y" n" ]% C" j
这个应该和平时做WB的蛋白量一样吧，平时WB上样量大概在100UG左右吧，所以你可以做做预实验来确定蛋白量，从而确定你自己制蛋白需要多少细胞。假如想显细胞内的蛋白那就可以直接用胰酶，假如细胞外的话我想应该用些比较温和的酶，不建议用胰酶

FYH

100多个就能做得出, 尽可能的加蛋白酶抑制剂, 不用酶处理.

ycjzyh

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400g离心10分钟岂不是所有的细胞都离心下来了？肿瘤球不都是低速，短时间离心比较好么？

eley

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7 \) m* T( P/ f7 E6 y% s1 T, ]
把细胞用滤网过滤，我用的是400目的滤网，这样滤网上的细胞几乎都是球球了