间充质干细胞的复活

舞街boy

前段时间我冻了一些间充质干细胞，想知道复活细胞的具体步骤以及冻存细胞最长可保存多久？谢谢各位。

bb6120

细胞复活都很简单的。从液氮把细胞拿出来，尽可能快的在水浴锅中解冻（这步要快）；之后把细胞放到离心管中，加培养基（至少等体积），接着离心去上清，加培养基铺板。整个流程，如果你复苏的细胞不多，加起来也就10-20min而已。

huajie881026

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" a0 u" F0 Y4 z7 P1 P6 Q
应该叫复苏，不叫复活。冻存在液氮罐里的细胞没有死何来复活这一说。复苏动作要快，从液氮取出后要尽快放置37°水浴。待差不多完全融化后加入15ml离心管，再加8-10ml medium，吹匀直接接种到培养皿，第二天换液，这种方法把DMSO稀释了很多倍，所以不用担心它的存在会对细胞损伤。也可以吹匀后直接离心去掉DMSO，再接种到培养皿，这样第二天就不用换液了！

brian111

+ y! d, X  ], N# D0 Z/ e. t* q7 \8 D2 e- r3 N9 i
楼上说的都很对，你可以把复苏水温调高至39度，这样可能效果更好（我们的经验），水浴的同时要不断晃动冻存管使其内部受热均匀。另外，最好不要等到冻存管的冰晶全部融化再从水浴中取出，待里面还有很小的一小块冰晶时取出，然后洗细胞。另外，所有的准备工作都要在复苏前准备好，比如离心机预冷，培养基放到离心管里，所有器材摆放到位。这样可以减少细胞与高浓度DMSO接触的时间。

chenguangyu

温度37-42度，如楼上所诉，39一42度比较好，因为现在冻存管传热比玻璃的稍慢。离心去dmso后可以用pbs或生理盐水洗一遍。另外细胞复苏液加到生理盐水中一定要慢。

chenguangyu

冻存时间要看你冻存的温度，液氮半年以上，负70三个月到半年，负40一个多月吧。

cartoonyang

有2种方法均可以成功复活MSCs：8 O. x6 R0 A/ Z/ u4 E
第一种：加了DMEM后离心洗涤DMSO，（或再用PBS洗涤1次），然后接种，第三天再换液；
9 Q$ Q% i& S9 D第二种，加了DMEM后直接接种，第二天换液去DMSO。

ruth891005@yaho

回复 huajie881026 的帖子; {8 n  D, I  }; e* m6 j  p# k6 y

, c" W  a: L, O1 ~1 {我们实验室也是用这种方法复苏细胞的，不过没有复苏过间充质干细胞，想请教一下高手间充质干细胞的复苏成活率大约多少啊，谢谢了！

huajie881026

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; C' `  B% e/ E: |7 O* E
6 O  X+ C! e: g4 _& {, q4 Q复苏的成功率取决于你冻存前的细胞活力，活力好的话复苏有90%以上，一皿细胞冻一管，复苏后还是满满一皿。活力不好的话，那肯定复苏效果不好，我以前差的时候40-50%也是有过的！

ruth891005@yaho

回复 huajie881026 的帖子4 k' i9 X0 Q3 ~* |
( T% E2 g" e  Z# i) C. Z
非常感谢！