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间充质干细胞的复活 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2012-12-1 11:32 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
前段时间我冻了一些间充质干细胞,想知道复活细胞的具体步骤以及冻存细胞最长可保存多久?谢谢各位。
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沙发
发表于 2012-12-1 21:59 |只看该作者
细胞复活都很简单的。从液氮把细胞拿出来,尽可能快的在水浴锅中解冻(这步要快);之后把细胞放到离心管中,加培养基(至少等体积),接着离心去上清,加培养基铺板。整个流程,如果你复苏的细胞不多,加起来也就10-20min而已。
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藤椅
发表于 2012-12-1 23:39 |只看该作者
回复 舞街boy 的帖子
) h: |" Y( Y2 e1 T0 C/ Q% h
; O: e$ M5 F% z# E2 V% r应该叫复苏,不叫复活。冻存在液氮罐里的细胞没有死何来复活这一说。复苏动作要快,从液氮取出后要尽快放置37°水浴。待差不多完全融化后加入15ml离心管,再加8-10ml medium,吹匀直接接种到培养皿,第二天换液,这种方法把DMSO稀释了很多倍,所以不用担心它的存在会对细胞损伤。也可以吹匀后直接离心去掉DMSO,再接种到培养皿,这样第二天就不用换液了!
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板凳
发表于 2012-12-2 12:53 |只看该作者
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本帖最后由 brian111 于 2012-12-2 12:55 编辑
5 |4 t/ ]) B" M/ z' T; o3 [; B* T. D- `/ ^" ], W
楼上说的都很对,你可以把复苏水温调高至39度,这样可能效果更好(我们的经验),水浴的同时要不断晃动冻存管使其内部受热均匀。另外,最好不要等到冻存管的冰晶全部融化再从水浴中取出,待里面还有很小的一小块冰晶时取出,然后洗细胞。另外,所有的准备工作都要在复苏前准备好,比如离心机预冷,培养基放到离心管里,所有器材摆放到位。这样可以减少细胞与高浓度DMSO接触的时间。
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报纸
发表于 2012-12-3 10:00 |只看该作者
温度37-42度,如楼上所诉,39一42度比较好,因为现在冻存管传热比玻璃的稍慢。离心去dmso后可以用pbs或生理盐水洗一遍。另外细胞复苏液加到生理盐水中一定要慢。
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地板
发表于 2012-12-3 10:06 |只看该作者
冻存时间要看你冻存的温度,液氮半年以上,负70三个月到半年,负40一个多月吧。
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发表于 2012-12-3 10:51 |只看该作者
有2种方法均可以成功复活MSCs:$ B6 X( Y5 J. n' N
第一种:加了DMEM后离心洗涤DMSO,(或再用PBS洗涤1次),然后接种,第三天再换液;
4 M3 B% k9 e  L第二种,加了DMEM后直接接种,第二天换液去DMSO。
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发表于 2012-12-3 16:31 |只看该作者
回复 huajie881026 的帖子
7 v: ~: Z0 V" I! P+ G5 }. Q6 e# V5 d- k$ D3 q) i
我们实验室也是用这种方法复苏细胞的,不过没有复苏过间充质干细胞,想请教一下高手间充质干细胞的复苏成活率大约多少啊,谢谢了!
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发表于 2012-12-3 23:24 |只看该作者
回复 ruth891005@yaho 的帖子! h0 Q+ d7 V. \7 G8 e1 X$ ]! Y
7 F5 B0 G! [7 T' i9 G
复苏的成功率取决于你冻存前的细胞活力,活力好的话复苏有90%以上,一皿细胞冻一管,复苏后还是满满一皿。活力不好的话,那肯定复苏效果不好,我以前差的时候40-50%也是有过的!
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发表于 2012-12-4 08:12 |只看该作者
回复 huajie881026 的帖子1 H8 r8 O! `" p  k

, G! f# L1 i9 C/ a* R% A$ n非常感谢!
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