流式分选后直接提RNA

cbjonathan

最近本实验室直接流式分选胚胎干细胞中的某个MARKER，收下来的细胞总是提不好，50万个细胞只提到了1UG，提的方法比较稳定，在想是不是过了流式后的细胞就是RNA降解得比较厉害？不知有哪位仁兄做得比较好的吗？

zhangweihwz

RNAlater可以直接加入到离心收集的细胞团甚至加入正在培养的细胞中。然后进行染色分选，分选后的样品直接用于RNA或者mRNA的抽提。

wnavy200299

1ug足够了吧。做实验应该可以！

evial

你做过后续试验了么？降解总会有一些，还要看你分选的参数情况，请你参看老外的文献吧。你得到的细胞已经比我们多很多了。

hcoohboy

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; p. v* F0 H8 V8 f
4 w, A* b0 r; J/ p/ w这是什么公司的产品？有datasheet吗？

ambassador

5×105，分选得到这么多细胞是一只小鼠的量吗？还是多只？1ug已经很多了！

zhangweihwz

回复 hcoohboy 的帖子$ l, {  p7 g- c+ R$ X/ y! s7 R
# I. @$ l: t# }& x6 ?- w
QIAGEN ，Life tech 等都有相应产品，可能商品名字有所不同。

hcoohboy

回复 zhangweihwz 的帖子5 ]+ }, R8 G, s* j5 d
1 _& o$ y  {5 H1 w6 l: A. W
谢谢你！

C囡OO囡L

回复 cbjonathan 的帖子& N) a. R/ p. p" g3 l

% P, J' c2 j, M5 y9 u) b我提RNA之后去测浓度是零啊......零......伤不起' Y  W7 Z; n) Y0 g
你分选收的时候是用什么管子收集的？多少g几分钟离心的？然后把溶液倒掉就直接加trizol吗？

细胞海洋

回复 C囡OO囡L 的帖子% Q* k' o, l3 z

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