流式分选后直接提RNA

cbjonathan

最近本实验室直接流式分选胚胎干细胞中的某个MARKER，收下来的细胞总是提不好，50万个细胞只提到了1UG，提的方法比较稳定，在想是不是过了流式后的细胞就是RNA降解得比较厉害？不知有哪位仁兄做得比较好的吗？

zhangweihwz

RNAlater可以直接加入到离心收集的细胞团甚至加入正在培养的细胞中。然后进行染色分选，分选后的样品直接用于RNA或者mRNA的抽提。

wnavy200299

1ug足够了吧。做实验应该可以！

evial

你做过后续试验了么？降解总会有一些，还要看你分选的参数情况，请你参看老外的文献吧。你得到的细胞已经比我们多很多了。

hcoohboy

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: _% c' L7 D. g" _3 |1 g) v5 D. r' u4 G' V  `/ x8 T# {8 p
这是什么公司的产品？有datasheet吗？

ambassador

5×105，分选得到这么多细胞是一只小鼠的量吗？还是多只？1ug已经很多了！

zhangweihwz

回复 hcoohboy 的帖子7 H/ L$ }% o7 y7 N
0 k, \8 [2 P) x/ X! K) A
QIAGEN ，Life tech 等都有相应产品，可能商品名字有所不同。

hcoohboy

回复 zhangweihwz 的帖子/ L) ]) L* B1 ?' n

0 X' G5 c& f, ]' ]% }$ B谢谢你！

C囡OO囡L

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3 d: Z5 t' j/ w7 f9 h, G  P, _: ~* E8 J6 a7 t8 Z# |
我提RNA之后去测浓度是零啊......零......伤不起
3 ^, Z) J* V- T  K% ~6 W8 b5 v你分选收的时候是用什么管子收集的？多少g几分钟离心的？然后把溶液倒掉就直接加trizol吗？

细胞海洋

回复 C囡OO囡L 的帖子1 Y/ I" G6 U3 P! L

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