请关于PC12细胞的一些问题

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有人用PC12细胞做过实验吗？有些问题请教达人，, A4 u  H" w# U( o; b; X9 n
1、一般是用分化的还是未分化的细胞做实验呢？
! }! V3 e$ P3 g( z1 G5 k2.是不是如果想研究神经元功能的话就要将之诱导为高分化型细胞。
/ Q: o& H( n" d& }2 Z3.听说PC12传代次数多了也会分化，还会疯长，那这种分化和NGF诱导的分化结构功能有什么区别呢？+ o. P9 d+ p: b+ X
4.NGF诱导的高分化PC12增殖能力怎么样，可以进行RNA干扰等实验吗？
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谢谢啦 ^^

86964109

看了一些讨论，有点明白了0 ^- C( I% }8 g9 {" f& _/ c
1.用分化的还是未分化的细胞做实验要看实验要求，好像做药物筛选用未分化的，因为分化后的细胞对药物更敏感。% j0 L" r- i, u$ ]: H* ]# q& @
2.但又有疑问了，如果我做神经元相关的实验是不是一定要做分化的呢，还是没有答案  u7 Q6 Y4 b7 J( a1 n4 B8 u- M) S7 j
3.国内的PC12有未分化、低分化和高分化之分，但是ATCC貌似只有未分化细胞，国外文章中做PC12分化一般用NGF诱导，Greene LA , Tischler AS . Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 2424-2428, 1976. PubMed: 1065897  文章里讲NGF诱导时的PC12没有增殖能力，但会一直分化，停止诱导后分化停止，增殖开始继续。这与国内的高分化PC12细胞株有增殖能力且不弱的说法不一致，而且国内高分化PC12的来源似乎有点不明确，细胞形态也与NGF诱导的细胞不一样。
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所以又有了新的疑问- K( b, w* A3 Q6 P' N
a 用国内的高分化PC12细胞株做实验能被杂志认可吗？
# F1 P- y! e% w3 pb如果不用高分化细胞，因为要做转染，是否必需保证细胞增殖能力呢？如果一定要用有增殖能力且NGF诱导分化神经元的PC12细胞做的话，可以这样设计么：先加NGF诱导至突触形成，停止诱导，恢复增殖，再开始转染？

chentian820

我以前一直做PC12，建议如下：) L2 m2 k3 i6 k" W
1 国家还是那个通用的只有未分化的PC12，加了NGF后增殖逐渐减弱，长出明显突起，最后几乎停止增殖。
" l! \8 S& Q; ]2 国内的低分化和高分化PC12细胞是中科院细胞库的。事实上连他们自己都搞不清楚他们这两株细胞是怎么个情况。我以前还电话咨询过，他们就简单滴说:不知道. 令我非常气愤。
* L) b" H) ~3 q' s$ c8 j3 我以前也查过是否有用中科院的高分化细胞株发表的SCI文章，截止去年，就只有一篇，而且影响因子很低，可信度就打折扣了。
, a* x8 V; N4 E0 k6 E4 如果你要买PC12细胞株，建议你到武汉的CCTCC去买，他们的细胞株很不错，以前我一直用他们的。
( S- e+ ^! _% ]9 S5 PC12做神经元实验可以用分化的和未分化的。特别是如果你要观察神经突起什么的，就要用分化的。
) A7 F4 }2 X* j* A( N6 有几个建议你可以参考：1 你为什么不先转染PC12，在做分化，或者筛选出稳转株后再做？2 如果你确实要做神经方面的实验，可以考虑用元代细胞或者神经干细胞。3 SHSY5Y和N2a都比PC12好养，而且也可以诱导分化（诱导因子都比NGF便宜），你可以使用这两株。& T& ^* |) a+ R

86964109

2 Q, F; \; b' P! I8 Y( z/ M" K$ g
, x7 W' \8 O' d8 m4 n$ a回复 chentian820 的帖子/ C- ?6 _- Z9 f# L- F: a  c3 g
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实在太感谢您的指点啦，是这样的，我想研究氧糖剥夺以及信号通路对于神经元细胞增殖和凋亡的影响，所以就想是不是要在诱导成熟的神经元细胞中进行实验，其实后续实验也没怎么想观察神经突触变化。另外考虑原代神经元细胞和神经干细胞不太好分离培养，就想找个成熟点的细胞系了，看过一篇文献是先慢病毒转染2d再NGF诱导3d的，做的挺漂亮的，不过我想做普通的瞬转，考虑到NGF诱导需要较长时间，担心瞬转会没有效果，又有点局限在一定要在得到神经元细胞基础上做实验，就这么设计了。。。

lhmxm

回复 86964109 的帖子0 `8 h' P7 Z: V- C" N
: `  z! B" g& l
文章题目是什么，可以提供一下吗？

86964109

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回复 lhmxm 的帖子
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碧落

回复 chentian820 的帖子: o% R' i! o; T: k, [# p: u6 M/ K2 |
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CT!!!!哈哈~

碧落

前段时间用了一阵子PC12，糊里糊涂的用着，后来才知道PC12是可以分化的。后来比对了下，发现我们实验室的应该是分化后的，都是有突起的，细长型的。

86964109

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你的分化细胞是培养过程中自己慢慢分化的吗，还是加过NGF的，我看到直接培养的分化型PC12好像是菱形的，没有突起

碧落

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  F# v1 y/ O' x6 Z$ A7 e
5 Q3 o3 a" m; S额，其实我们的就是普通的培养基HG-DMEM+10%FBS。不用加NGF，可以传代，生长速度也可以的。形态嘛，说菱形也可以，就是有突起的，不是未分化的那种圆球形的。