请关于PC12细胞的一些问题

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有人用PC12细胞做过实验吗？有些问题请教达人，
. Y  |8 B* e' ?+ q9 D9 Z1、一般是用分化的还是未分化的细胞做实验呢？
/ A, G/ _7 |0 h" w2.是不是如果想研究神经元功能的话就要将之诱导为高分化型细胞。
: ?) X& o7 h; R' _3.听说PC12传代次数多了也会分化，还会疯长，那这种分化和NGF诱导的分化结构功能有什么区别呢？' b) G5 _- y6 T; G  M+ k' w
4.NGF诱导的高分化PC12增殖能力怎么样，可以进行RNA干扰等实验吗？: Q; S4 D: A6 U+ G, W

& S3 Z5 a% G' D0 Z/ |* d谢谢啦 ^^

86964109

看了一些讨论，有点明白了
0 b' A  R/ ?! c+ @' R" C% z" d0 _1.用分化的还是未分化的细胞做实验要看实验要求，好像做药物筛选用未分化的，因为分化后的细胞对药物更敏感。* N( R: `. I; @/ T! x' r! f
2.但又有疑问了，如果我做神经元相关的实验是不是一定要做分化的呢，还是没有答案" w& G* J" H6 B& Q* U, x6 B
3.国内的PC12有未分化、低分化和高分化之分，但是ATCC貌似只有未分化细胞，国外文章中做PC12分化一般用NGF诱导，Greene LA , Tischler AS . Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 2424-2428, 1976. PubMed: 1065897  文章里讲NGF诱导时的PC12没有增殖能力，但会一直分化，停止诱导后分化停止，增殖开始继续。这与国内的高分化PC12细胞株有增殖能力且不弱的说法不一致，而且国内高分化PC12的来源似乎有点不明确，细胞形态也与NGF诱导的细胞不一样。
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所以又有了新的疑问
- o- ]) @! i5 Z1 U* \a 用国内的高分化PC12细胞株做实验能被杂志认可吗？
% w9 j+ y9 ^) O" ~* f+ l- h, fb如果不用高分化细胞，因为要做转染，是否必需保证细胞增殖能力呢？如果一定要用有增殖能力且NGF诱导分化神经元的PC12细胞做的话，可以这样设计么：先加NGF诱导至突触形成，停止诱导，恢复增殖，再开始转染？

chentian820

我以前一直做PC12，建议如下：# n- i6 j' l+ `# U( o
1 国家还是那个通用的只有未分化的PC12，加了NGF后增殖逐渐减弱，长出明显突起，最后几乎停止增殖。
; I) v; R" d  P- ~/ j1 {2 国内的低分化和高分化PC12细胞是中科院细胞库的。事实上连他们自己都搞不清楚他们这两株细胞是怎么个情况。我以前还电话咨询过，他们就简单滴说:不知道. 令我非常气愤。
4 ^( v( V# n8 Y  o+ @2 M3 }3 我以前也查过是否有用中科院的高分化细胞株发表的SCI文章，截止去年，就只有一篇，而且影响因子很低，可信度就打折扣了。! Y" V' @% E5 e9 e: J! A
4 如果你要买PC12细胞株，建议你到武汉的CCTCC去买，他们的细胞株很不错，以前我一直用他们的。
$ W- A) ^- Y% [# w3 k8 k5 PC12做神经元实验可以用分化的和未分化的。特别是如果你要观察神经突起什么的，就要用分化的。, [7 l6 W0 b# Q; S! s6 Z
6 有几个建议你可以参考：1 你为什么不先转染PC12，在做分化，或者筛选出稳转株后再做？2 如果你确实要做神经方面的实验，可以考虑用元代细胞或者神经干细胞。3 SHSY5Y和N2a都比PC12好养，而且也可以诱导分化（诱导因子都比NGF便宜），你可以使用这两株。- b0 C/ `) D6 m" Z( V6 ^

86964109

$ x: d$ l; ?% P, \  Q! E

8 v$ n* ?4 c8 F# \  _8 e3 ]回复 chentian820 的帖子
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3 f# h. D* ]  H$ v* n" ?实在太感谢您的指点啦，是这样的，我想研究氧糖剥夺以及信号通路对于神经元细胞增殖和凋亡的影响，所以就想是不是要在诱导成熟的神经元细胞中进行实验，其实后续实验也没怎么想观察神经突触变化。另外考虑原代神经元细胞和神经干细胞不太好分离培养，就想找个成熟点的细胞系了，看过一篇文献是先慢病毒转染2d再NGF诱导3d的，做的挺漂亮的，不过我想做普通的瞬转，考虑到NGF诱导需要较长时间，担心瞬转会没有效果，又有点局限在一定要在得到神经元细胞基础上做实验，就这么设计了。。。

lhmxm

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  s) W2 B: r# D: r8 U
$ K0 {. L$ J9 ~2 S文章题目是什么，可以提供一下吗？

86964109

7 ?* C0 r/ b4 h" b# N
& K+ G) X8 d8 r- w  c回复 lhmxm 的帖子
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碧落

回复 chentian820 的帖子( U" p0 |. o, _( d% {. K% U0 }/ v

2 A( e8 Q3 D: }1 Q, NCT!!!!哈哈~

碧落

前段时间用了一阵子PC12，糊里糊涂的用着，后来才知道PC12是可以分化的。后来比对了下，发现我们实验室的应该是分化后的，都是有突起的，细长型的。

86964109

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: }$ S' T  K0 F+ b你的分化细胞是培养过程中自己慢慢分化的吗，还是加过NGF的，我看到直接培养的分化型PC12好像是菱形的，没有突起

碧落

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; Y7 I' Q9 w; w6 u- m# Q' i  q3 E% w2 b" j8 b, P
额，其实我们的就是普通的培养基HG-DMEM+10%FBS。不用加NGF，可以传代，生长速度也可以的。形态嘛，说菱形也可以，就是有突起的，不是未分化的那种圆球形的。