试做胎盘干细胞 求助

pengxuleo

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你好，请问一下，分离胎盘干细胞对胎盘新鲜程度有要求吗？我试了两次，胎盘都是4度冰箱放了12小时后的，实验没有成功
7 E# R; i. C& O# H( B还有就是我用组织贴壁法是，组织培养两天就变色了，不知道什么原因？请问大侠有何见解？

pengxuleo

回复 niyou 的帖子
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请问一下，一般贴壁法培养胎盘干细胞，贴几天就可以去掉组织了啊？

流泪的鱼

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5 t+ y9 |# ^! y: I. [$ t3 K
; a! I$ S$ |+ ]5 n$ I当然胎盘组织越新鲜越好，我们基本上是十二小时内的胎盘。要放到胎盘保存液中保存，不能直接放到保鲜袋中。
- }$ j7 U' A8 M  ~    的确是组织培养几天后颜色就变成褐色的，但是没关系，只要不污染，继续培养下去直到组织周围爬出细胞为止。

pengxuleo

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十分感谢

willow0711

学习了，我也正准备做胎盘间充质干细胞

莫邪小仙

我们是从胎盘分的胎盘亚全能干细胞，从羊膜中分的，其余的部分都不要了。

michellejo

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& S/ o. E- G0 z+ j& p9 \3 I请教一下胎盘保存液是什么？是商品化的吗？还是自己配的？我们之前是用PBS或是生理盐水保存的，但是分离效果不好。

孙帅帅

胎盘中贴壁细胞的分离与培养  无菌取胎盘胎儿面中心区域，0.1mol/L PBS液 (pH 7.4)冲洗去残血：① 酶消化培养法  剪碎后先使用胶原酶IV 37℃消化30min，再用胰蛋白酶消化10min，反复吹打使成单细胞悬液和外植块混合物，200目滤网过滤收集单细胞，小心置于淋巴细胞分离液上，2200r/min 离心15min获得单个核细胞，以1×106个/ml的密度悬浮于低糖DMEM培养基中（含15% FBS，100U/ml 青－链霉素），置37℃、 5% CO2和100％湿度培养箱培养，随后每3~4d换液1次，经3~4周可见成纤维细胞在瓶底汇合成片。 约到80％汇合时用0.25%胰蛋白酶消化，以细胞密度5×104个/cm2传代培养；② 采用组织微块贴壁培养法  将胎盘组织剪碎成<1mm3的微块后，37℃倒置培养4h使其贴壁，然后小心翻转培养瓶使培养基浸过组织块，随后每3~4d换液1次，约2d后可见有细胞从组织块中游离出来，约10d可围绕组织块长成一片片细胞群，此时可加大冲洗力度将组织块去除，经0.25%胰蛋白酶消化，以细胞密度5×104个/cm2传代培养。
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willow0711

回复 liyujuanmarry 的帖子& H0 v/ [0 j2 t) m0 Q
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你好，请问你的胎盘小叶剪碎直接培养大概几天换次液？要几天爬出细胞，谢谢！

pcljsw2008

我是取的期待根部，那块绒毛膜量多而且粗大，比胎盘其他位置的要密集，顺着脐带根部剪一个半径八厘米左右的圆圈就够了