试做胎盘干细胞 求助

zhangjieyctc

回复 孙帅帅 的帖子6 I+ j( i8 n* x; J8 a& X' w6 E- k
- U/ U& N" ]( z$ _5 k* X
剪碎后，胎盘组织上不是有很多红细胞吗？这个好像很难洗干净的，对细胞爬出没影响吗？

孙帅帅

回复 zhangjieyctc 的帖子! c* e9 G& G1 C- j& }1 E2 ?

' g8 c" y+ |9 W" i+ [6 F6 G: z有影响     清洗的时候尽量把组织清洗干净！不要带血！

chenchunlei

回复 nydfy 的帖子
" H2 Z: V  a' J% |  {+ B. v8 O" V: J% f& L$ z  O
可不可以说说你的酶消化法具体实验步骤，谢谢

caustic

我们的胎盘用组织分离器分离完后，在进行酶消化，再用100um的无菌滤网过滤，最后得到数量很多的细胞悬液，可进行进一步的细胞培养，但问题是每次的细胞活性都不高，都只有2%左右，还是保守估计，请问有哪位高手知道 就细胞活性这个问题有什么好的办法？

whywho

做胎盘一般取胎盘子面的绒毛，我也试做了楼主说的两种方法，酶消化法效果不太好，组织快贴壁法有细胞爬出，但是爬出细胞比较慢，而且细胞液比较少。

细胞海洋

回复 caustic 的帖子2 t3 k3 k4 Z$ S6 D4 l# C
- y9 S* K; `& w' m( p" U0 l; s9 q
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xiaolu19781999

酶消化培养法􀀁 剪碎后先使用胶原酶IV
* t) D2 w( }9 Y3 [0 t37 􀀁 消化30min, 再用胰蛋白酶消化10min, 反复吹- E3 X8 T# J: |) P/ Z. ~
打使成单细胞悬液和外植块混合物, 200 目滤网过
4 m! @! n4 I& n, \7 T- g+ x滤收集单细胞, 小心置于淋巴细胞分离液上, 2 200 r􀀁
: U# ^- N% l7 E( l/ Wmin 离心15min 获得单个核细胞, 以1 􀀁 106 个􀀁ml 的8 D7 [9 j) B  Z) W
密度悬浮于低糖DMEM 培养基中( 含15% FBS, 100
. B2 m4 e5 ^6 v! RU􀀁ml 青- 链霉素) , 置37 􀀁 、5% CO2 和100% 湿度
# G5 g9 p# w/ C  }9 w  ~* ]# z培养箱培养, 随后每3~ 4 d 换液1 次, 经3~ 4 周可( Q+ \4 w2 V( L) Y6 u1 T
见成纤维细胞在瓶底汇合成片。约到80%汇合时用
9 P6 |& h) p* p# b) Y. C" m# S0. 25% 胰蛋白酶消化, 以细胞密度5 􀀁 104 个􀀁cm2 传
% n. D) t7 i8 S. }/ F* Q代培养;
/ j" D" c, h  B4 U2 n+ S4 M$ u用这个方法试试

jinhaifeng

胎盘的话的确是挺复杂的，现在做哪一部分的都有，羊膜，平滑绒毛膜，包蜕膜，壁蜕膜都可以养出间充质干细胞，还有养胎盘小叶组织的，通常称亚全能干细胞，方法的话用胶原酶消化比较好，贴壁法太慢