用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。1 B& m3 ^3 b6 u2 Y! o3 P3 G# K, f; [$ N
方法一：: B8 U7 G! k% S  R# n# n
1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；
6 \1 k, @% c0 M2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。/ B' V' s) ~, y4 |) @; S% G
方法二：7 b! F7 P0 i9 {
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液 9 u: D+ d3 b, B- Z. o7 s) H
10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll / @- v% V' v1 q0 j
特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子& }7 I0 a+ l& Y3 \0 g/ R

. t- m7 M' F$ l  ^7 R你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

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+ j2 T: A& Z9 l9 ?' O
6 K: C" t% S9 c0 Q5 a: w2 T& D8 }嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

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9 u+ Y  s) q8 Y5 w0 f& o+ Y/ o) z$ x
呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代
& j! q  w* y1 h8 P( e( u/ U/ y

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

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) p  k. b8 l; s( X7 e
5 f& @7 u# v, |$ `4 g0 }& T那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

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! g: @2 r1 @* g+ Q9 i7 N3 ^! o* @- j% ^, z! H( [6 S
鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

4 [4 G! z" u* ^/ k) L2 l3 Z8 C' |2 \! A1 ]
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# p1 `& q3 P1 X9 X& E( b' H
0 J+ _8 s6 k4 E9 `, T  J& u: [关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。