新鲜组织如何冷冻保存？

lmh_yixue

新鲜组织取到后想先冷存起来以后用的时候再取出来进行细胞培养。用剪刀剪后加入冻存液直接冷存吗？还是先用胶原酶消化后冻存？还是复苏时再用胶原酶消化？

lousia04306

直接将组织减随，然后放入冻存管，加入一定比例的冻存液，放入梯度降温盒，梯度降温后，冻存，复苏的时候将组织取出，再用胶原酶进行消化。

huangcong1988

回复 lousia04306 的帖子% p' }6 ~; J1 s. M8 i% f9 J
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想知道能冻多久，还有就是冻存液加入的量是多少（体积比）？复苏的话跟普通细胞复苏温度一样吗？复苏以后再分细胞还能分得好么？用酶消化能分离得到细胞的话，用组织块贴壁法呢？

liyujuanmarry

1 我之前复苏了一支9个月前冻存的脂肪组织，复苏的组织仍有很好的ADSC长出，所以冻存9个月应该是可以的2 _8 i9 s) j- H% J
2 可以0.5mL组织中加入1mL的冻存液+ {: ?' U& r: w/ w3 u
3 复苏后您可以将组织消化分离，也可以直接接种（即组织贴壁法），方法合适的话是可以长出很好的细胞的+ h2 Q2 Y' e8 P. V: C" F- R
个人体会，仅供参考

flybear

这要看你做什么用了！！！！如果仅是简单的冷冻组织，还好说！如果冷冻后还想复苏，那你冷冻液的配置，冷冻时间，都是问题的！

lmh_yixue

回复 lousia04306 的帖子6 Y$ M* f+ \: u

# Z: r. M6 F* l: o谢谢！！！这正是我想要的答案！！！

cnlindan01

冻存前尽量减少对组织的损伤，所以理论上，冷冻之后消化更合适。但组织块相对较大，不利于抗冻剂扩散，需要更多的时间让抗冻剂进行渗透。

ag2017

首先要看你冻存的是什么组织，做什么用。  大体可以这样做：将组织剪、碎成小的组织块，和配好抗冻剂快速充分混匀，分装到冻存管中。放入程序降温和中。随后放入-80℃冰箱中。在-80℃冰箱中冻存1年没问题。如果放在液氮中我做过2年的没问题。复苏在37-40℃水浴锅中快速复苏。稀释、洗去抗冻剂。之后再按照贴壁法或酶消化法进行培养。建议使用贴壁法。

lmh_yixue

回复 ag2017 的帖子$ S6 _  ~. g7 c( j4 d8 B& q- I: W
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谢谢！冻存的是小鼠子宫内膜细胞。有间质细胞和腺细胞

shy8610

组织直接冻存还能取出用于细胞培养？个人没有相关的实践，不敢妄图非议，但是从目前我冻存复苏的经验，貌似将组织先行消化成单细胞后，应该效果会更好，另外如果是取核酸就随意