如何筛选“稳定过表达目的基因”的hES细胞株？

bigsnow55

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      我想用含目的基因的表达载体转染hES细胞，然后筛选阳性克隆，建立稳定表达目的基因的hES细胞株。" r; L* ?& p+ g1 h7 J
   有一个问题就是，由于hES生长在MEF上，而MEF不是细胞系，生长能力也很有限。在建立稳定表达株时，筛选阳性克隆需要约2周，那么在转染hES时及转染后，MEF可能大多会死掉，MEF没有了，hES就会分化，那稳定细胞株就更难建立了。# `" f, y) p5 ~+ |2 s; j' z
   不知道哪位有这方面的经验，麻烦多指正。多谢了！
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chutu

在筛选当中，如果你发现feeder细胞状态变差，可以直接补种一些MEF细胞。

bigsnow55

回复 chutu 的帖子* M+ S. z+ C8 m+ \9 d+ E
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补种很方便。但问题是里面有抗生素，补种进去的MEF还没贴壁就死掉了吧？

bio-bin

可以先将hES接种到Matrigel上，或者使用conditioned medium维持hES在MEF上的生长。

chentian820

feeder free + matrigel + mTeSR

bigsnow55

回复 chentian820 的帖子6 K- z) H  ^% \" N# k3 m. f! u9 f

; W% M: {7 v0 o( b6 C( K谢谢！无MEF培养当然是最好的，只是培养成本似乎挺贵。

chentian820

回复 bigsnow55 的帖子5 e" h; J2 f4 D! w

* R4 a/ I7 w0 ]# [! I% v其实你可以去买有抗性的MEF，这样就两全其美了。

bigsnow55

回复 chentian820 的帖子8 m' l" b3 e0 ]; N4 Z
1 C" {( f+ i/ G' E
谢谢chentian820！我在想，如果用慢病毒感染，由于转染效率很高，是不是就可以不用筛选了呢？另外，国内有卖这种有抗性的MEF的公司吗？再次感谢！

chentian820

回复 bigsnow55 的帖子! w" q1 U# V6 u4 U

5 n0 G. O) i! l" ~  ?你到中科院生化所干细胞平台咨询一下，他们可能会有的

bigsnow55

回复 chentian820 的帖子
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谢谢，查到了！