如何高效的去除分化的人胚胎干细胞？

nichifanlema2

请教各位高手，我培养的人胚胎干细胞有一半多点是分化了的，有没有比较好的去除分化的克隆的方法？谢谢~~

michael1013

: K4 }7 R) J4 A
7 w+ J0 S* S6 N& v7 A
我们一般是在镜下用枪头刮除分化的。但是这样做比较费眼睛，尤其是分化克隆多的话。
! n, u. T6 k+ e; A如果有经验的话，分化的细胞和未分化的用肉眼是可以识别出来的。也可以不用显微镜直接刮除分化细胞。担心挂不干净的话可以最后再显微镜检查一遍。  H+ @5 u* P3 ]& J( e
% ~+ I* H) y, i4 L
可能不够高效

nichifanlema2

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, a- d% M/ ]9 O& `- C. M/ W' U/ V7 s: R% i9 E; u
谢谢。确实是这样的啊，酶消化的方法是否能行呢？

michael1013

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; A2 W: }/ }4 h! N1 d/ z& X0 K* x0 Z1 y( B8 A- U5 J
貌似不行

chentian820

教你一个很有效的方法。如果你的分化的hESC不超过10%，那你就只需要把分化的克隆做上记号，然后把它们吸掉。如果你的分化的部分超过10%，这个时候除分化的话就会有点浪费人力了，那你牛只需要把未分化的克隆吸到一个新的培养板中培养，这么做是最有效的方法。你可以试一试。

nichifanlema2

回复 chentian820 的帖子+ H  y" t0 z6 b" a6 }
3 G' z3 A* W2 c$ p; S
感谢支招，不过培养的人胚胎干细胞是贴壁的啊，如何吸掉？

chentian820

回复 nichifanlema2 的帖子6 ?! M0 \0 V5 k$ W$ y  }

6 v& f& b' L4 B* I' C8 Q1 h* z一般在体视镜下进行，如果没有的话，你就用小枪头戳一下

nichifanlema2

回复 chentian820 的帖子/ b9 v  Y# Z$ r# ^& T  L
9 @# Q6 m. h9 a$ n9 M3 _7 a6 d
请问您用的体视镜是什么品牌，什么型号的啊？多谢了。

chentian820

回复 nichifanlema2 的帖子2 [' o6 o, t& a& Q- W+ B/ W

+ j; B4 \& H* t; m, w, i8 ^* L! I奥林巴斯的，实际上国产的就可以了，但要配个超净台

lchoxy

如果你用的是dispase消化的话，一般多传几代就干净了。如果你是在是分化很多的话，又没体视显微镜可以先在一般的倒置显微镜中将分化的集落圈出来，在消化之前用枪头或者移液管将他们刮掉。