帮忙看下脐带血间充干哦

fay898

这是1月19号的照片。细胞是12年11月15号分离培养的脐带血间充干，开始克隆挺大也比较多，但后来越长越慢，现在是这个样子。
6 ^1 u7 @9 n, d1月23号把当时几皿细胞传为1皿，就长成了这样~~! ^1 f- x# z9 e) @# k
这细胞到底因为什么会这样啊？？？还能要么？？？
7 x1 O5 d# i7 o9 N向各位高手求救！！

ag2017

目前脐带血干细胞体外扩增培养技术是个瓶颈。不知道你培养的目的是什么     这么长时间了   扔了吧   继续培养意义不大

fay898

回复 ag2017 的帖子) B5 @: d) v+ h5 U1 r+ K
* B& l' `- b8 j) |- i. b
想在体外稳定扩增，与别的细胞共培养~~偏偏总是养不好~您养这种细胞吗？！

yinfuhua

回复 fay898 的帖子) G( P! ]( @5 [
: J7 N# j. ~* D. t
看细胞状态第二张照片还不如第一张。再养下去确实没什么意义了。每次传代注意细胞密度，太稀疏了不会长好的。还有消化时间要掌握好。如果细胞因消化时间过长导致的损伤那是不可逆的了。

fay898

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3 O) O. V# p6 q. O. y+ Z: w7 V$ n& `+ L) h, a7 g2 E! \0 A
0.25%-EDTA的胰酶在37℃孵箱消化5min，最后皿底还有好多细胞没有消化下来！！反复吹打了几遍就离心了~~请问脐带血间充干最初接种密度多少呢？我用10cm皿，接种10^7个细胞，会不会太多了，影响最初的贴壁呢？！

644414915

回复 fay898 的帖子; m& V9 d0 M+ H' L

) N! g& a& G7 B好像不是这样的吧，不到一分钟就全掉下来了啊
! v+ x7 k: _) _! I1 l" o难道我养的细胞不是msc

yinfuhua

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# |5 f4 e0 {1 Y6 c3 I! a% N# r2 q% [" G# l  h
如果浓度是0.25%-EDTA胰酶消化5min，我感觉有点长了（因为浓度大些）。这个浓度一般消化2-3min就可以了。在镜下看细胞变圆马上终止消化。在最后皿底没有消化下来的细胞基本就不要了。因为增加消化时间后，继续消化下来的细胞状态已经不好了，再培养也不会长好的。你培养的密度有点大，10^6次方差不多吧。你可以试下。

fay898

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* @0 l+ y( S2 d9 E0 i3 L* H9 G  [, Y; I* x: _0 l
好的！谢谢！！我试试！

fay898

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恩，可能是杂细胞吧，下次消化时我会注意的！如果是MSC应该很快消化下来的~

mtdj1314

细胞密度太低了吧，这个也长不好了，仍了吧。。。消化后吹打注意轻柔一点~