肿瘤干细胞球消化问题，消化后不长

yxzxlmlf

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( K" e5 ~8 i3 I5 _# F, ~
我只是养MCF-7，其他的不知道。这种细胞里生长因子含量不能太高，是10-20ng/mL，细胞数2万/mL，参考文献里来的。你说的胰酶消化我是按照那种方法来的，但是就是不长。细胞贴壁的话可能是你没用PBS洗细胞。把细胞消化后用PBS洗一下然后再种到无血清培养基里。我用的corning的培养瓶或者六孔板，普通的那种，没有超低吸附。

qq348940434

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, l0 ~: m0 ?+ |) b: ]0 C- {5 {你的意思是消化之后还要用PBS洗一遍么，你说的那个corning的板子我也用过，不过贴壁了。- z5 z$ g9 H4 K# Y
我感觉是不是我的细胞因子的浓度过高，本来应该饥饿而死的普通肿瘤细胞因为这些高浓度的细胞因子而生存了下来。

yxzxlmlf

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! h0 c  S9 q  p7 U( R2 ~. F2 O' ]( i4 F0 |, a3 ?
你可以适当降低浓度。我说的PBS洗是指从有血清培养到无血清培养的过渡阶段

qq348940434

yxzxlmlf 发表于 2013-2-1 11:03 2 F' S; p' ^* J/ _8 m) r( J$ A
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6 x' U% `) r" u; C$ g你可以适当降低浓度。我说的PBS洗是指从有血清培养到无血清培养的过渡阶段

' J$ X! W# p4 n0 R3 t还是有点没懂你的意思，是说普通培养的肿瘤细胞用胰酶消化离心之后弃上清之后再用PBS洗一遍么？

yxzxlmlf

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5 M- e  Q% J6 Y是的，因为洗了后会去掉普通培养基里的血清，就不会贴壁了

qq348940434

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+ [. b( j$ l: d3 K+ P哦，谢谢。培养基里加胰岛素到底有用么？主要作用是干啥？看文献 有些说加了的，有些说没加。

yxzxlmlf

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% o$ x6 O/ b+ q0 [1 H
) k+ Z" e" N4 R4 j/ c, x/ t: Z可以不加，也是促进增殖吧

570505

回复 qq348940434 的帖子: M% H) L0 [" k4 n

0 V3 ?1 D/ C9 B促进蛋白质合成，促进增殖。

maiweiqian

qq348940434 发表于 2013-2-1 09:30 7 O, a: _: t5 Z4 o9 b
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- y0 a: \) w+ _$ B/ s& F4 }* ^7 E对了 我想问问你那个成球实验怎么做的，我已经试过4种方法了，还是没养出来，细胞老 ...

9 w- [* D- a* T, H我也说说我的情况。我最近也在做无血清培养，也做MCF-7和HepG2，我消化的条件和lz是一样的，我消化之后不是不成球，是那些细胞一团团聚集不规则聚集起来，样子肯定不像球！然后hepg2的情况更奇葩，种到无血清培养液之后第二天观察，就大把大把不规则地聚集在一起了，我觉得也不是球来的，你们怎么看这种情况？你们有没有图片可以交流下？' H( m4 ?" w" M! A3 r/ O5 y
还有一个情况就是，lz你的mcf-7成球用了多少天?球长到多大了？我的mcf-7貌似第二第三天就长到50微米了，我觉得很难相信它是球。