请教脐带干细胞培养方法

bings214

怎么样一种培养方法或者消化方法可以相对提高一个生长率和细胞数量呢？之前一直用开酶消化法，单一的胶原酶消化，但是一直的生产率都不是很高，细胞数量也不大。希望看看大家还有些什么更好的方法可以分享下

大少爷

组织块贴壁法
& x; ]! W8 h/ h) S( t& T将脐带表面迅速用生理盐水冲洗三遍，冲洗干净表面血液。剪成2-4cm小段，放在生理盐水里，撕开或剪开动脉附近脐带，抽离2条整根动脉，剪开静脉，撕掉静脉壁；将华氏胶撕出来，小剪刀剪碎，再用眼科剪剪成0.5-2mm3。
/ R$ G5 H/ k6 F  A9 f+ d
7 I% v- d  O( C) b& n网上文献很多。。。3 v( q7 X, L' n# y% ^/ z
网上文献很多

山风

组织贴壁法效果比较好，而且组织块可以重复培养

bsx1111

回复 大少爷 的帖子
" a" h; r, z# _& D, H/ k' P- N' Q+ T; x( F# p* d/ g; R
问一下，培养时用什么培养基比较好

漂泊的风

培养基用alpha-MEM即可，配上10%的胎牛血清就可以了( t* [. ?+ q4 Y/ T9 Z" \% I

暖羊羊

组织贴壁法长出来的细胞比较纯，但是原代培养周期超微长一点。用基础培养基就可以了，个人认为养UC-MSC血清很重要，所以如果有条件的话还是买进口的好血清吧。

山风

α-MEM,加上胎牛血清，效果比较好，血清最好用进口的，还有一些厂家的无血清培养基也不错，就是价格高些。

孙帅帅

个人认为贴壁法比较好掌握，养出来的细胞也不错。
  B2 W: m9 U& K（1）、去除脐带动脉、静脉和脐带粘膜，分离华通氏层，剪成1mm3的小块。在剪切过程中可以适当的加几滴培养液以保持细胞湿润。& V5 h2 H: \9 y( D
（2）、将组织小块平铺在培养瓶底部，间隔5mm左右，放置2~4小时后，加少量培养基培养（加入的培养基最好刚刚没过组织块）加入培养基时动作尽量要轻，不要让组织块漂浮！

xiaolong

普遍认为贴壁法比较好，这方面的文献挺多的，本论坛就有很多，你可以多看看

天天天雨雨

之前有很多这样的帖子可以看一下，一般都用组织块贴壁法培养，细胞培养出来较纯，可以传代培养，数量充足