脐带间充质冻存

damaoshu

我们用血清90%+10%DMSO的配方.

老姜

水浴箱中装蒸馏水，冰化为红豆大小就在洁净台上用酒精喷冻存管，用37度预温的培养液接种 。

山风

回复 湖南干细胞 的帖子
  F* q" m* c' Q8 |4 X0 f; _0 Q8 b( d$ e" |' m4 }7 f* v! k
目前我们是从液氮中取出直接复苏的，没有先放到-80℃。复苏后打开冻存管是有时会出现液氮从冻存管中排出的声音，只要开盖是缓慢进行就可以，目前我没有碰到过什么危险的情况。冻存的时候进液氮与瓶口没有拧紧有一定的相关性，也与冻存管反复从液氮中取出再放进去有关，热胀冷缩！

湖南干细胞

回复 山风 的帖子
' s6 ~  f7 i1 \% @: W9 k5 v9 h7 |7 \+ J. @+ {* I3 e
哦，书上写的果然与现实有很大差距。

湖南干细胞

回复 damaoshu 的帖子0 E& x" K) Z' H
# p1 j! j5 d; M! G7 N
谢谢。

湖南干细胞

回复 老姜 的帖子
: j& K  [+ y9 N+ t
0 }: s. X5 u! `6 Y恩，喷酒精比较方便。

湖南干细胞

关于冻存，先4℃放置1/2到1小时，可以促进DMSO在细胞毒性较小情况下渗入细胞起到保护作用，细胞内冰晶减少了，但是-20℃放置1-4h不等，DMSO也会变成固态，应该也会产生结晶，为什么没啥影响？

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子2 I: o. K0 N7 C! ~* f$ f) k# i5 R& }( p/ a

. j) s4 |$ {$ S2 u% ]6 ^6 T% V按照前人研究在程序冷冻仪冷冻细胞的标准是最初的1小时要每小时温度降几度，后面几小时温度又要每小时降几度，以达到细胞浆中基本没有冰晶形成导致戳伤细胞器。做实验是手工操作所以前人研究出不同温度降温，其目的一致。在-20度置1h后，还应置-80度过夜，次日直接放入液氮中，冷冻效果不错。

雁南飞

楼主的配方应该是没问题的，DMSO可以降得更低一点,毕竟对细胞有毒性.8 N/ T: R5 }/ q- @( R
具体冻存哪一代,要看你复苏后需要再传多少代,一般来说,10代以内是稳定的,超出10代生长就不好了,所以冻存最好在五代之前.

湖南干细胞

回复 雁南飞 的帖子% }9 @! U. H3 q" _3 S* @1 y

  [+ k% P  }" F9 O* l# ^谢谢你的意见。