ips转染问题

若兰汀

我购买的广州中科院的ips细胞，这个细胞建系的时候是用逆转录病毒转染的OCT4等因子，现在我需要沉默这个ips细胞中的一个基因，可以用慢病毒转染进行RNAi实验吗，之前逆转录病毒插入的位点是否会影响靶基因knockdown位点？请教各位，谁能回答我的问题，不胜感激。

yuhaoze

可以用慢病毒，不过由于ips性质跟胚胎干细胞相似，所以你的逆转录病毒的启动子得有相应的选择，选择ips分化后沉默的启动子还是在ips分化后仍能强力表达的启动子。
; M% y8 {2 E& {) c6 t至于外源基因插入位点是否能够影响到你的实验，这个说不准，还是得通过实验确定，不过我认为概率比较小。

若兰汀

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8 h- g+ @. M$ _0 p( }# a" g4 S$ i: F- y谢谢你的回答，但我不是很理解你说的，你说的ips分化后沉默或仍继续强表达的启动子，这个启动子是指那几个多能性基因吗？

yuhaoze

不是，一般那几个基因在将细胞诱导成ips之后就自动沉默了，而且我们也不希望它们继续表达。: Z' |; T- q2 F" ?8 E
这里说的是你导入的目的基因的启动子，这个启动子需要在胚胎干细胞内强力表达，才能达到你沉默某个基因的要求。1 F* c3 s1 b# `/ R
另外，如果你的实验设计分化，那么你导入的基因在ips分化成某种细胞之后是否还能稳定表达， 这个也取决于它的启动子是什么。

若兰汀

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  Q  G' q9 x- @+ N( R3 B1 I+ g' A4 N7 w2 I) A, p0 |# d
嗯，我明白你说的意思了，我想要慢病毒携带一个shRNA进入ips去knockdown靶基因，沉默后再诱导分化，诱导过程中它是否能持续表达进而沉默靶基因，这个我就不关心了，我要沉默的那个靶基因相当于一个开关，我想知道关闭它是否利于分化。非常感谢你的讲解。

若兰汀

回复 yuhaoze 的帖子0 K  V$ ^" t! P

, Q) t% e* i2 v; l9 n  F2 m6 v5 C你好，我的启动子是U6，不知道合适不