急！！大家慢病毒构建时是不是都加了Flag、GFP 嘌呤霉素基因和目的基因呢？

等待feng

1 @2 k. |6 `/ ], y, e) }3 Z急！！！！！我的细胞 转染基因后需要筛选 我想用嘌呤霉素筛，但是又牵扯到一个转染率的问题 单独嘌呤霉素没办法测转染率吧？所以我又准备加GFP基因。 还有将来WB测蛋白的时候应该测FLag和目的基因的蛋白吧？ 但是我的一个目的基因 加了这么多小基因 会不会对我的目的基因有影响啊？？求助

monk125

病毒滴度和转染效率我一般直接做流式，直接测GFP的荧光，可算出基本效率，筛选可用嘌呤霉素和FCM sorting 的方法，不知道你后面实验是否需要用全部阳性细胞做，他们公司商品化的病毒也是两者都有，应该不会有太大影响，这个还是跟你使用的载体有关，为了不阻碍其他蛋白的表达，质粒上有设有额外的序列如RISE防止空间位阻效应

等待feng

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' ]9 r8 b! Z( e* F/ {( W, L3 L
! h0 b' }2 Q; |' A7 }6 K, \我后来需要筛选用全部转染细胞呢。。。。我就是找的公司做   但公司给我说的   加这么多基因 不知道会不会对目的基因有影响     ; t/ n' D( F  o- o  j. k
   我也不能用流式分选 因为需要的细胞量太大   只能用嘌呤霉素   但这么多基因 担心对目的基因有影响

monk125

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: m. l0 s; P5 z# S  H# A2 `% a% z
* J: i) B# D. I. e. g$ F: T可能会有影响吧 我也不确定 你先试试看 我自己的载体只有GFP的荧光 因为感染效率挺高的 所以不需要特别筛选

等待feng

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5 Z  g8 t8 L- C! C7 v# T( u
( e8 z4 c7 d, j) E0 j0 t1 {1 u4 J哦   那你的细胞转染率有多大 算高呢？

monk125

挺高的80-90%