免疫荧光二抗用什么稀释？

请叫我晓白

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一抗规格是100ug/200ul的请问一般用什么浓度呢

xiaoyurly

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3 s9 i. o! X9 u+ h% g
; I5 }, e7 c4 _; F( k+ N. G( _5 T, v/ i% y是这个意思，再尝试一下吧，免疫染色有时候确实难出，加油

xiaoyurly

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$ K5 j6 i/ {5 c# {& B( r2 e$ b: |3 s6 h$ m, e( A8 U
c-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用了石蜡切片经过抗原修复才出的结果，而且我们是用santa的抗体都能出（1:100），荧光染色我们从不用H2O2处理，可以上一张图片给你看下，心肌切片

ruth891005@yaho

PBS或者BSA都可以，可以都试一下，比较一下效果

请叫我晓白

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2 P; K: o3 f  s$ s0 q) Z8 ?+ V
: P6 @" `4 U9 w0 d) [1 M多谢老师耐心解答6 F8 a) i; @, W
能copy一份您做石蜡切片免疫荧光的步骤给我吗% k  w" H% t# P  Z$ U$ s
刚接触实验很多都不懂% P" ^2 p- m' f8 O7 r
多谢了

xiaoyurly

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* `1 b1 `4 F- g+ r% ~7 ]6 C& o5 @; J6 j1 y
石蜡切片常规脱蜡复水，柠檬酸缓冲液热修复，88-96℃ 15-20min，冷却1h后PBS洗一次，羊血清（原液以1:20比例用PBS稀释）封闭室温30min，一抗1:100溶于含羊血清1%的PBS中，4℃过夜；转天取出复温1h左右，PBS洗5min×4次，对应荧光二抗孵育，4℃ 4h or室温1h，PBS洗4次，封片镜检

请叫我晓白

回复 xiaoyurly 的帖子3 \# q3 |( h% z' ?
* j# y2 [8 M1 r9 ]' f
多谢多谢

nevermore

用BAS稀释抗体和用PBS稀释 原理上有什么不同？我试过用PBS稀释，信号强度很弱。另外，抗体浓度过高会使结果强度降低么？为了提高荧光强度，我特意提高了点工作浓度，可效果还是不好，其他步骤都是按照标准protocol

细胞海洋

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请叫我晓白

xiaoyurly 发表于 2013-3-18 09:50
7 T) d6 G! ^7 U$ q回复 请叫我晓白 的帖子
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/ l1 Z! @- e8 U3 k: s/ y0 Jc-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用 ...

% t- r9 F6 s) f
老师，我最近做了几次都没有结果您图片上的结果。哎 郁闷。我想请问您当初做冰冻也没做出来会不会是因为c-kit这个抗原不适合做冰冻切片？需要做石蜡切片才行？我想可能有几个原因：1.c-kit+细胞很少没有切到或找到2.一二抗浓度不合适3c-kit这个抗原不适合做冰冻切片; f. \. g+ y8 Q5 {% V  l3 q
就您的了解c-kit是否可以做冰冻切片呢？我看了许多国外文献他们的染c-kit的方法都是免疫组化用石蜡切片（具体方法太简略了），但是结果的图却是共聚焦的图。期待您的解答。还有您做的是骨髓的c-kit细胞吗？我做心脏固有的c-kit细胞