免疫荧光二抗用什么稀释？

请叫我晓白

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; t. U0 c1 X. \! H$ N
一抗规格是100ug/200ul的请问一般用什么浓度呢

xiaoyurly

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5 r5 N* g3 N# ~% `: [! ~# A
7 V# f% _' ]9 c$ H& M" o是这个意思，再尝试一下吧，免疫染色有时候确实难出，加油

xiaoyurly

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6 s' K- W9 s1 \7 i/ h0 M8 ]
, E/ `" U$ L8 i0 \c-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用了石蜡切片经过抗原修复才出的结果，而且我们是用santa的抗体都能出（1:100），荧光染色我们从不用H2O2处理，可以上一张图片给你看下，心肌切片

ruth891005@yaho

PBS或者BSA都可以，可以都试一下，比较一下效果

请叫我晓白

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& C, O# F3 \1 {* f8 {$ r) Z: N( a" p0 G  z3 r
多谢老师耐心解答. i. ]  k% p' q' Q9 m
能copy一份您做石蜡切片免疫荧光的步骤给我吗
. k9 f$ S( w( g, E刚接触实验很多都不懂0 |9 n1 P, B4 {1 ^# H3 }2 {
多谢了

xiaoyurly

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$ F) l8 o9 M( o/ m/ s1 v! f
1 c$ N# Q  o; C, @6 ]石蜡切片常规脱蜡复水，柠檬酸缓冲液热修复，88-96℃ 15-20min，冷却1h后PBS洗一次，羊血清（原液以1:20比例用PBS稀释）封闭室温30min，一抗1:100溶于含羊血清1%的PBS中，4℃过夜；转天取出复温1h左右，PBS洗5min×4次，对应荧光二抗孵育，4℃ 4h or室温1h，PBS洗4次，封片镜检

请叫我晓白

回复 xiaoyurly 的帖子  |, g6 s2 \) n4 [( d+ n4 Y; K3 ^3 g
7 [2 X( Y/ P2 Q9 }4 V
多谢多谢

nevermore

用BAS稀释抗体和用PBS稀释 原理上有什么不同？我试过用PBS稀释，信号强度很弱。另外，抗体浓度过高会使结果强度降低么？为了提高荧光强度，我特意提高了点工作浓度，可效果还是不好，其他步骤都是按照标准protocol

细胞海洋

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请叫我晓白

xiaoyurly 发表于 2013-3-18 09:50 2 o4 z8 t: i' ?
回复 请叫我晓白 的帖子) ]# i& F' a/ t0 [% [

9 f& `# [6 r3 D1 H/ `0 ec-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用 ...

" \$ F( L" b+ l; ^7 w
老师，我最近做了几次都没有结果您图片上的结果。哎 郁闷。我想请问您当初做冰冻也没做出来会不会是因为c-kit这个抗原不适合做冰冻切片？需要做石蜡切片才行？我想可能有几个原因：1.c-kit+细胞很少没有切到或找到2.一二抗浓度不合适3c-kit这个抗原不适合做冰冻切片3 [7 D# [; Y2 |/ R  K
就您的了解c-kit是否可以做冰冻切片呢？我看了许多国外文献他们的染c-kit的方法都是免疫组化用石蜡切片（具体方法太简略了），但是结果的图却是共聚焦的图。期待您的解答。还有您做的是骨髓的c-kit细胞吗？我做心脏固有的c-kit细胞