免疫荧光二抗用什么稀释？

请叫我晓白

回复 weiyepan 的帖子- M8 f+ o: F( h; k1 m! a; M! p

$ y: M* y& u9 G' }0 M/ ^0 [一抗规格是100ug/200ul的请问一般用什么浓度呢

xiaoyurly

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7 P6 [" }3 V% V3 r9 d4 h. d; O& e
# @1 X8 P, Y" U6 Z" P6 X是这个意思，再尝试一下吧，免疫染色有时候确实难出，加油

xiaoyurly

回复 请叫我晓白 的帖子% z. O: k  l' m: ^* G! U( ~# ]

( f8 I- a/ W; {  `& ^7 [6 Rc-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用了石蜡切片经过抗原修复才出的结果，而且我们是用santa的抗体都能出（1:100），荧光染色我们从不用H2O2处理，可以上一张图片给你看下，心肌切片

ruth891005@yaho

PBS或者BSA都可以，可以都试一下，比较一下效果

请叫我晓白

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' l, b& M  j6 M" C
. a' M% A0 j, M7 T- [, O多谢老师耐心解答* O7 T0 }* H. Z& c) x2 l& F
能copy一份您做石蜡切片免疫荧光的步骤给我吗3 W( I! i2 v2 q  D! S2 s) g
刚接触实验很多都不懂. H2 T( i( {9 r9 y
多谢了

xiaoyurly

回复 请叫我晓白 的帖子* G( v3 c4 S# x) _' J

, K4 P! Q$ j' N+ I7 x4 \石蜡切片常规脱蜡复水，柠檬酸缓冲液热修复，88-96℃ 15-20min，冷却1h后PBS洗一次，羊血清（原液以1:20比例用PBS稀释）封闭室温30min，一抗1:100溶于含羊血清1%的PBS中，4℃过夜；转天取出复温1h左右，PBS洗5min×4次，对应荧光二抗孵育，4℃ 4h or室温1h，PBS洗4次，封片镜检

请叫我晓白

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$ q4 U9 [* y& n% g4 E2 v( s7 _- N/ u
多谢多谢

nevermore

用BAS稀释抗体和用PBS稀释 原理上有什么不同？我试过用PBS稀释，信号强度很弱。另外，抗体浓度过高会使结果强度降低么？为了提高荧光强度，我特意提高了点工作浓度，可效果还是不好，其他步骤都是按照标准protocol

细胞海洋

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7 d$ q* S6 L$ o) Q7 g
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请叫我晓白

xiaoyurly 发表于 2013-3-18 09:50
, b/ @; R1 P; W# J回复 请叫我晓白 的帖子
2 B4 I2 H) y$ C  z0 G
0 W4 ?# {% W2 _4 Gc-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用 ...

% ]% W- k! n. I' P2 e2 y' W) @
老师，我最近做了几次都没有结果您图片上的结果。哎 郁闷。我想请问您当初做冰冻也没做出来会不会是因为c-kit这个抗原不适合做冰冻切片？需要做石蜡切片才行？我想可能有几个原因：1.c-kit+细胞很少没有切到或找到2.一二抗浓度不合适3c-kit这个抗原不适合做冰冻切片( s7 |/ d- M8 J1 D: @) _, i( j; U
就您的了解c-kit是否可以做冰冻切片呢？我看了许多国外文献他们的染c-kit的方法都是免疫组化用石蜡切片（具体方法太简略了），但是结果的图却是共聚焦的图。期待您的解答。还有您做的是骨髓的c-kit细胞吗？我做心脏固有的c-kit细胞