细胞周期检测，结果有点奇怪

WAX

最近做细胞周期检测，具体步骤如下，细胞在70%乙醇中，4℃固定过夜，PBS清洗，加入100 μg/ml RNase A, 37℃避光孵育30min, 再加入终浓度为40 μg/ml 的PI，室温染色30min，PBS清洗重悬，流式检测，但有一个很明显的sub-G1的峰，细胞状态挺好的呀，怎么回事？RNase A 已经好久了，但一直放在4℃，不知会不会有影响？？重复了一次还是这样* d, m$ v4 x1 R! [! _  Q; B" X

2013-3-21 20:36 上传

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shagu

不懂，学习一下！

飞翔的十字架

目测在荧光强度100左右有G2/M峰，可以调大电压，把荧光值拉的开一点，会看的清楚些

WAX

回复 飞翔的十字架 的帖子
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6 P" L1 t: B6 Y6 L, C0 s谢谢，不过我比较关心的是前面多出来的那部分sub-G1

monk125

可能和你固定的时候有关系 建议不需要酒精固定 用0.5%的皂素吧

monk125

还想问问你流式上机测了多少细胞？一般做周期3W-5W比较好，还有流速不要超过200cells/s，我觉得你细胞有点少，所以G0/G1期的峰不太好看，另外目的了下 你那不属于subG1期的细胞，一般subG1期 之前还有细胞的，应该是跟细胞量有关系，又或者你可以把那群细胞从设门中去除掉

monk125

你是用的那台机子上机的？

monk125

给你看看这个protocol，我现在做周期习惯用皂素，比较快，不用过夜固定了

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回复 monk125 的帖子3 Q0 l* |6 h7 ^6 v0 n) j
5 M* l8 \  }. G* A* N
多谢啊

WAX

回复 monk125 的帖子
( r, P8 J) Z1 j% K, [/ w! d$ c3 A" o" `+ H. s, O6 E$ Y! {* ~( N" y* I
FACS Aria II, 一般记录1w作用