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查看: 65832\|回复: 11	go [请教] 细胞周期检测，结果有点奇怪 [复制链接]

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楼主

发表于 2013-3-21 20:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

最近做细胞周期检测，具体步骤如下，细胞在70%乙醇中，4℃固定过夜，PBS清洗，加入100 μg/ml RNase A, 37℃避光孵育30min, 再加入终浓度为40 μg/ml 的PI，室温染色30min，PBS清洗重悬，流式检测，但有一个很明显的sub-G1的峰，细胞状态挺好的呀，怎么回事？RNase A 已经好久了，但一直放在4℃，不知会不会有影响？？重复了一次还是这样8 z/ H+ W- p9 f: r$ u

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沙发

发表于 2013-3-21 21:16 |只看该作者

不懂，学习一下！

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飞翔的十字架

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藤椅

发表于 2013-3-21 23:35 |只看该作者

目测在荧光强度100左右有G2/M峰，可以调大电压，把荧光值拉的开一点，会看的清楚些

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板凳

发表于 2013-3-22 09:27 |只看该作者

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回复飞翔的十字架的帖子
* Q* f" e4 N6 {% c
谢谢，不过我比较关心的是前面多出来的那部分sub-G1

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报纸

发表于 2013-3-22 09:37 |只看该作者

可能和你固定的时候有关系建议不需要酒精固定用0.5%的皂素吧

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地板

发表于 2013-3-22 09:43 |只看该作者

还想问问你流式上机测了多少细胞？一般做周期3W-5W比较好，还有流速不要超过200cells/s，我觉得你细胞有点少，所以G0/G1期的峰不太好看，另外目的了下你那不属于subG1期的细胞，一般subG1期之前还有细胞的，应该是跟细胞量有关系，又或者你可以把那群细胞从设门中去除掉

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7楼

发表于 2013-3-22 09:43 |只看该作者

你是用的那台机子上机的？

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8楼

发表于 2013-3-22 09:54 |只看该作者

给你看看这个protocol，我现在做周期习惯用皂素，比较快，不用过夜固定了

Protocols forPLANT DNA and Cell__ Cycle Staining.pdf

14.62 KB, 下载次数: 16

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9楼

发表于 2013-3-22 10:56 |只看该作者

回复 monk125 的帖子( g, ~( ]& `7 R" [0 i
1 g* v& q: i1 T) f3 @
多谢啊

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10楼

发表于 2013-3-22 16:07 |只看该作者

回复 monk125 的帖子: V2 l, n! y: y

FACS Aria II, 一般记录1w作用

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