慢病毒感染感染过后细胞怎么成这样了？

franklinhg

我也遇到过这种情况。 后来分析了很久，原因可能是ES培养基中的巯基乙醇或者是feeder灭活不是很彻底。怀疑是巯基乙醇的原因，当时老板贪图便宜，非要以常规分析纯的巯基乙醇代替细胞培养级别的，结果其中的杂志太多，导致feeder直接漂了，而且毒性大，根本就做不出实验来。 feeder灭活不彻底的话，MEF张的很快，对培养基有个适应过程，大约3天后过于密集，最终feeder飘起来。
4 Y# I) ~0 i# k- n: T7 P其实最重要的我怀疑是PH值问题。这个问题虽然小，但也很有可能的。

chips100

是feeder的质量问题

wangshumin12311

首先，你的feeder很稀，我几乎看不到你的feeder，feeder的汇合度差不多在90%左右是比较合适的，此外细胞也不能在feeder上种这么多，feeder上通常中2-10万细胞（10cm盘），你这个如果是10cm盘点话，起码有三五十万了（最后两张）。另外慢病毒的细胞毒性会较大，给予的建议是：降低感染的病毒量、使用高密度无feeder诱导重编程等方法。

wangshumin12311

忘了补充，feeder需要包被gelatin，无feeder诱导需要包被Matrigel

huangcong1988

回复 guen 的帖子) ~8 B% E& V( T. r0 {7 C5 g
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培养基没有变颜色，还是很澄清的

huangcong1988

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  T. p5 ~: \1 D" A! n+ ?' w: B7 u$ Y4 e% Z- V2 N
非常感谢，这个feeder可能还是有点稀了，而且接的细胞似乎也有点多了，慢病毒的量我加了很少，而且接种后细胞形态也很正常，就是换了ES培养基后细胞死了很多，几乎全部脱落，而且惨不忍睹，无feeder的方法我也想试试，BD的matrigel有点贵吧？我看了一下，5ml快两千了。

huangcong1988

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7 Q# g: q# G% v. s还有问您一下，买matrigel一般哪个货号的？

sizhengliu

依我的经验，换液时细胞处于无液体状态太久或离酒精灯太近，都有可能致细胞死亡，出现楼主图片所示现象。我一般对敏感期的细胞，都是换一孔加一孔的。

huangcong1988

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谢谢，不过我换液也是很快的，基本不会存在细胞太干的情况啊

varing

应该不是细胞量的问题，很大可能就是ES培养基配制的问题，某种成分超量了或者不好，也可能是PH的问题。