慢病毒感染感染过后细胞怎么成这样了？

redmaple

1.ES细胞的形态不是这样的。& A( W0 r8 k$ r7 v
2.这跟我养的成纤维细胞形态是一样的，feeder cells也是成纤维细胞，观察不到也就不足为奇了

amyliu

首先你做reprogramming的步骤好像有问题，一般情况下都是先用病毒感染细胞，感染后用细胞的培养基培养几天，扩增后，传代到feeder上在用ES细胞的培养基，并且开始感染的时候，你的起始细胞的浓度，太高这样影响你的结果，有可能在整个过程中你的一部分细胞已经脱离。从你的图片中得到的是：你的feeder在这个过程中已经消失或是你自己感染的细胞没有存活

maokai345

我认为是病毒的量加多了，我的细胞加慢病毒的时候只要加多了，也会这样，而且会死一些。一般加过12h之后给它换个液，稍微会好一些

张月儿

虽然不太确定原因（初步推测是你在转移感染后细胞过程中出现的问题，应该不是污染或feeder细胞的问题，你可以同时接种一盘feeder，不转接感染后的细胞作为对照，只换液看看）。而且，我在诱导时，是在感染后一周内观察有克隆样细胞出现后才往feeder上转的。

lgfffancy

你这个问题可能原因有点多/ D% e5 H9 N4 f- Y, n! C
不过你首先应该明白的一点就是lentivirus转染，对细胞 肯定是有伤害的。
( T. g. Q. m" K8 D- F- d7 _* y所以细胞会死一部分，然后存活下来的细胞换液是小心，等增值后在正常培养。
3 z+ Y. D; j" @8 c) o; i4 f$ H* {" P( @然后检测转染效率。$ I+ M9 g3 m( q5 n0 \& C& Z

张月儿

因为是转移后出现的现象，所以可能是转移过程的操作问题，应该不是污染，可以同时将一盘不转移感染后细胞的feeder作为对照，对其只换液（ES培养基）。而且，不清楚你们的protocol，我们的操作是感染后并不立即转移到feeder细胞上，而是感染后一周内出现克隆样细胞后才转移，你也可以参考一下。

lgfffancy

还有个很重要的问题，我上次搞忘说了 一定记住要加polybrene
. X: h3 s# A8 M! ?. _它可以提高转染效率，加了会很有帮助你可以试试。

陆萌

这是要诱导IPS么 感觉慢病毒感染效果不佳 仍然是成纤维状态 可以等细胞形态有一定改变后再将其转种到滋养层上，有变成干细胞趋势后再换为ES培养基